Ποια είναι η διαφορά μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA
Η κύρια διαφορά μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA είναι ότι στην έμμεση ELISA, η πλάκα μικροτίτλου επικαλύπτεται με το δείγμα με πρωτεΐνες προς ανίχνευση, ενώ αυτή η πλάκα είναι επικαλυμμένη με πρωτογενές αντίσωμα στην ELISA σάντουιτς . Επιπλέον, η μέθοδος ELISA σάντουιτς είναι 2-5 φορές ευαίσθητη μέθοδος από την έμμεση ELISA.
Η έμμεση και η ELISA τύπου σάντουιτς είναι δύο μέθοδοι ELISA (ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία) που είναι ενζυμικές ανοσοδοκιμές στερεάς φάσης (EIA). Είναι συγκριτικά ευαίσθητες μέθοδοι, οι οποίες είναι επίσης πιο γρήγορες και αναπαραγώγιμες.
Βασικές περιοχές που καλύπτονται
1. Τι είναι η Έμμεση ELISA
– Ορισμός, Διαδικασία, Σημασία
2. Τι είναι το Sandwich ELISA
– Ορισμός, Διαδικασία, Σημασία
3. Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA
– Περίληψη κοινών χαρακτηριστικών
4. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA
– Σύγκριση βασικών διαφορών
Βασικοί όροι
ELISA, Δευτερογενές αντίσωμα συνδεδεμένο με ένζυμα, έμμεση ELISA, πρωτογενές αντίσωμα, ELISA σάντουιτς, ευαισθησία
Τι είναι η Έμμεση ELISA
Η έμμεση ELISA είναι ένας τύπος ELISA δύο σταδίων, ο οποίος χρησιμοποιεί δύο τύπους αντισωμάτων για την ανίχνευση και τον ποσοτικό προσδιορισμό μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης σε ένα δείγμα. Η διαδικασία της έμμεσης ELISA είναι η εξής.
- Επίστρωση της επιφάνειας της πλάκας μικροτιτλοδότησης με το δείγμα.
- Πλύσιμο για να αφαιρεθούν οι μη δεσμευμένες πρωτεΐνες από το πιάτο.
- Επώαση της πλάκας μικροτιτλοδότησης επικαλυμμένης με πρωτεΐνη με το πρωτεύον αντίσωμα.
- Πλύσιμο για την αφαίρεση των μη δεσμευμένων αντισωμάτων από την πλάκα.
- Επώαση της πλάκας μικροτιτλοδότησης με το συνδεδεμένο με ένζυμο δευτερεύον αντίσωμα.
- Πλύσιμο για την αφαίρεση των μη δεσμευμένων αντισωμάτων από την πλάκα.
- Προσθήκη του αντίστοιχου χρωμογόνου υποστρώματος που απαιτείται από την ενζυματική αντίδραση.
- Ανίχνευση των σημάτων που παράγονται από την πλάκα.
Εικόνα 1:Έμμεση ELISA
Γενικά, η έμμεση ELISA είναι μια καλή μέθοδος για τη διάγνωση βακτηριακών, ιικών ή παρασιτικών λοιμώξεων ποσοτικοποιώντας τα αντισώματα που παράγονται από τον οργανισμό έναντι των παθογόνων αντιγόνων. Εδώ, τα πολυκλωνικά αντισώματα μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως δευτερεύον αντίσωμα στην έμμεση ELISA. Επομένως, είναι πιο οικονομικό. Από την άλλη πλευρά, διαφορετικοί τύποι πρωτογενών αντισωμάτων σε διαφορετικούς αριθμούς μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη σύνδεση με την πρωτεΐνη στόχο. Ως εκ τούτου, η έμμεση ELISA είναι μια αντίστοιχα πιο ευέλικτη και πιο ευαίσθητη μέθοδος για την ανίχνευση μιας πρωτεΐνης στόχου.
Τι είναι το Sandwich ELISA
Η ELISA σάντουιτς είναι ο άλλος τύπος ELISA δύο σταδίων, που χρησιμοποιεί τόσο πρωτογενές όσο και συνδεδεμένο με ένζυμο δευτερεύον αντίσωμα για την ανίχνευση. Το κύριο χαρακτηριστικό της ELISA σάντουιτς είναι ότι το σάντουιτς της πρωτεΐνης που μας ενδιαφέρει μεταξύ πρωτογενούς και δευτερογενούς αντισώματος. Η διαδικασία για το σάντουιτς ELISA είναι η εξής:
- Επίστρωση της επιφάνειας της πλάκας μικροτιτλοδότησης με το πρωτεύον αντίσωμα.
- Πλύσιμο για την αφαίρεση μη δεσμευμένων πρωτογενών αντισωμάτων από την πλάκα.
- Επώαση της πλάκας μικροτιτλοδότησης με το δείγμα.
- Πλύσιμο για να αφαιρεθούν οι μη δεσμευμένες πρωτεΐνες από το πιάτο.
- Επώαση της πλάκας μικροτιτλοδότησης με το συνδεδεμένο με ένζυμο δευτερεύον αντίσωμα.
- Πλύσιμο για την αφαίρεση μη δεσμευμένων δευτερογενών αντισωμάτων από την πλάκα.
- Προσθήκη του αντίστοιχου χρωμογόνου υποστρώματος που απαιτείται από την ενζυματική αντίδραση.
- Ανίχνευση των σημάτων που παράγονται από την πλάκα.
Εικόνα 2:ELISA σάντουιτς
Σημαντικά, η ELISA σάντουιτς είναι καλή για την ανίχνευση πρωτεϊνών χαμηλού έως υψηλού μοριακού βάρους. Επίσης, είναι πιο ευαίσθητη (2-5 φορές) από την άμεση ή έμμεση ELISA. Επιπλέον, η ELISA σάντουιτς είναι μια πιο ειδική τεχνική, καθώς χρησιμοποιεί δύο αντισώματα για να συλλάβει την πρωτεΐνη-στόχο.
Ομοιότητες μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA
- Η έμμεση και η σάντουιτς ELISA είναι δύο τύποι μεθόδων ELISA που βοηθούν στον εντοπισμό και τον ποσοτικό προσδιορισμό πρωτεϊνών σε ένα βιολογικό δείγμα.
- Και οι δύο τύποι μεθόδων ELISA αποτελούνται από μια μέθοδο δύο βημάτων.
- Επιπλέον, χρησιμοποιούν τόσο πρωτογενές αντίσωμα όσο και δευτερεύον αντίσωμα συνδεδεμένο με ένζυμα για την ανίχνευση μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης συμπεριλαμβανομένων αντιγόνων, αντισωμάτων, ορμονών κ.λπ.
- Επίσης, λόγω της συμμετοχής δύο τύπων αντισωμάτων σε αυτούς τους δύο τύπους αναλύσεων, η ειδικότητά τους είναι υψηλή.
- Εξάλλου, και οι δύο μέθοδοι είναι μέθοδοι υψηλής απόδοσης που είναι επίσης εξαιρετικά ευαίσθητες. Είναι ταχύτερες και αναπαραγώγιμες αναλύσεις.
Διαφορά μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA
Ορισμός
Η έμμεση ELISA αναφέρεται σε μια ELISA δύο σταδίων που περιλαμβάνει δύο διαδικασίες δέσμευσης πρωτογενούς αντισώματος και επισημασμένου δευτερογενούς αντισώματος, ενώ η ELISA σάντουιτς αναφέρεται σε έναν άλλο τύπο ELISA δύο σταδίων στον οποίο η πρωτεΐνη Το ενδιαφέρον συγκεντρώνεται μεταξύ πρωτογενούς και δευτερογενούς αντισώματος. Επομένως, αυτή είναι η κύρια διαφορά μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA.
Επίστρωση της πλάκας μικροτίτλου
Στην έμμεση ELISA, η επικάλυψη της πλάκας μικροτιτλοδότησης είναι το δείγμα με πρωτεΐνες, ενώ, στην ELISA σάντουιτς, η επικάλυψη είναι το κύριο αντίσωμα.
Δέσμευση του δευτερογενούς αντισώματος
Το δευτερεύον αντίσωμα συνδέεται με το πρωτεύον αντίσωμα στην έμμεση ELISA ενώ το δευτερεύον αντίσωμα συνδέεται με την πρωτεΐνη που μας ενδιαφέρει στην ELISA σάντουιτς.
Ευαισθησία
Μια άλλη διαφορά μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA είναι ότι η έμμεση ELISA είναι μια ευαίσθητη μέθοδος ενώ η ELISA σάντουιτς είναι 2-5 φορές ευαίσθητη από την έμμεση ELISA.
Εφαρμογές
Ενώ η έμμεση ELISA είναι καλύτερη για τον προσδιορισμό της συνολικής συγκέντρωσης αντισωμάτων στα δείγματα, η ELISA σάντουιτς είναι καλύτερη για την ανάλυση σύνθετων δειγμάτων. Επομένως, αυτή είναι μια άλλη διαφορά μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA.
Συμπέρασμα
Η έμμεση ELISA είναι ένας τύπος ELISA δύο σταδίων που εμπλέκεται στη δέσμευση του πρωτογενούς αντισώματος στην πρωτεΐνη ενδιαφέροντος στην πλάκα μικροτιτλοδότησης, ακολουθούμενη από την ανίχνευση από ένα ένζυμο- συνδεδεμένο δευτερογενές αντίσωμα. Από την άλλη πλευρά, η ELISA σάντουιτς είναι ο άλλος τύπος ELISA δύο σταδίων που εμπλέκεται στη δέσμευση της πρωτεΐνης που ενδιαφέρει με το πρωτεύον αντίσωμα, το οποίο επικαλύπτει την πλάκα μικροτιτλοδότησης ακολουθούμενη από την ανίχνευση με το συνδεδεμένο με ένζυμο δευτερεύον αντίσωμα. Επομένως, η κύρια διαφορά μεταξύ έμμεσης και σάντουιτς ELISA είναι η ακολουθία της διαδικασίας.