Γιατί τα κύτταρα μετασχηματίζονται με PUC18 και πλασμίδιο lux αναπτύσσονται παρουσία αμπικιλλίνης;
* puc18: Πρόκειται για ένα διάνυσμα κλωνοποίησης, ένα μικρό μόριο DNA που χρησιμοποιείται για τη μεταφορά ξένου DNA σε βακτηρίδια. Περιέχει μια *προέλευση αναπαραγωγής *, επιτρέποντάς του να αναπαραχθεί μέσα στο κελί του ξενιστή και μια *θέση πολλαπλής κλωνοποίησης *όπου μπορεί να εισαχθεί ξένο DNA.
* γονίδιο AMPR: Αυτό το γονίδιο κωδικοποιεί ένα ένζυμο που ονομάζεται βήτα-λακταμάση , η οποία υποβαθμίζει την αμπικιλλίνη, ένα κοινό αντιβιοτικό.
* Μετασχηματισμός: Όταν τα βακτήρια μετασχηματίζονται με PUC18, αποκτούν το γονίδιο AMPR μαζί με το πλασμίδιο. Αυτό το γονίδιο εκφράζεται, παράγοντας βήτα-λακταμάση.
* Αντίσταση αμπικιλλίνης: Η παραγόμενη βήτα-λακταμάση απενεργοποιεί την αμπικιλλίνη στο μέσο ανάπτυξης, επιτρέποντας στα μετασχηματισμένα βακτήρια να επιβιώσουν και να αναπτυχθούν παρουσία του αντιβιοτικού.
Συνοπτικά:
* Το πλασμίδιο PUC18 μεταφέρει το γονίδιο AMPR.
* Τα μετασχηματισμένα βακτήρια εκφράζουν το γονίδιο AMPR, παράγοντας βήτα-λακταμάση.
* Η βήτα-λακταμάση υποβαθμίζει την αμπικιλλίνη, καθιστώντας τα βακτήρια ανθεκτικά στο αντιβιοτικό.
Ως εκ τούτου, μόνο τα μετασχηματισμένα κύτταρα που φέρουν το πλασμίδιο PUC18 θα επιβιώσουν και θα αναπτυχθούν σε μέσο που περιέχει αμπικιλλίνη. Αυτή η επιλεκτική πίεση χρησιμοποιείται για να εξασφαλιστεί ότι μόνο τα κύτταρα που έχουν ενσωματώσει με επιτυχία το πλασμίδιο έχουν επιλεγεί για περαιτέρω μελέτη ή χειραγώγηση.
