Ποια είναι η σωστή σειρά για την τυπική προετοιμασία ενός ιστολογικού δείγματος;
1. Σταθεροποίηση:
* Αυτό είναι το πρώτο και πιο κρίσιμο βήμα.
* Ο στόχος είναι να διατηρηθεί η δομή του ιστού και να αποφευχθεί η αποσύνθεση.
* Τα κοινά σταθεροποιητικά περιλαμβάνουν φορμαλίνη, γλουταραλδεΰδη και αλκοόλ.
2. Αφυδάτωση:
* Το νερό απομακρύνεται από τον ιστό χρησιμοποιώντας μια σειρά διαλυμάτων αλκοόλ (συνήθως 70%, 90%, 95%και 100%).
* Αυτό προετοιμάζει τον ιστό για ενσωμάτωση σε κερί παραφίνης.
3. Εκκαθάριση:
* Το αλκοόλ απομακρύνεται από τον ιστό και αντικαταστάθηκε με διαλύτη που είναι αναμίξιμο τόσο με κερί αλκοόλ όσο και παραφίνης (π.χ. ξυλόλιο, τολουόλιο ή ιστοπρίληνα).
4. Ενσωμάτωση:
* Ο ιστός διεισδύεται με λιωμένο κερί παραφίνης υπό κενό.
* Αυτή η διαδικασία επιτρέπει στο κερί να διαπεράσει τον ιστό και να στερεοποιηθεί, δημιουργώντας ένα σταθερό μπλοκ που μπορεί να χωριστεί.
5. Τμήμα:
* Το μπλοκ παραφίνης κόβεται και τεμαχίζεται σε λεπτά τμήματα (συνήθως πάχους μικρομετρίας 4-10) χρησιμοποιώντας ένα μικροτόμα.
6. Τοποθέτηση:
* Τα τμήματα τοποθετούνται προσεκτικά σε γυάλινες διαφάνειες, συνήθως με υδατοδιαλυτή κόλλα.
7. Deparaffinization:
* Το κερί παραφίνης αφαιρείται από τα τμήματα ιστού χρησιμοποιώντας μια σειρά διαλυτών (π.χ. ξυλόλιο, τολουόλιο).
8. Επανυδάτωση:
* Τα τμήματα ιστών επανυδατώνται μέσω μιας σειράς διαλυμάτων αλκοόλ (π.χ., 100%, 95%, 90%, 70%και νερό).
9. Χρώση:
* Αυτό είναι όπου τα συστατικά των ιστών απεικονίζονται.
* Υπάρχουν πολλοί λεκέδες, ο καθένας με τις δικές του ιδιότητες και εφαρμογές.
* Παραδείγματα περιλαμβάνουν αιματοξυλίνη και ηωσίνη (H &E) για γενική μορφολογία και ειδικούς λεκέδες για συγκεκριμένους κυτταρικούς τύπους ή δομές.
10. Τοποθέτηση:
* Τα χρωματισμένα τμήματα είναι τοποθετημένα με καλύμματα και μέσο τοποθέτησης (π.χ. DPX, Permount).
11. Ετικέτα:
* Οι διαφάνειες επισημαίνονται με σχετικές πληροφορίες (όνομα ασθενούς, ημερομηνία, τύπος ιστού, λεκέ).
Σημείωση: Αυτό είναι ένα τυπικό πρωτόκολλο. Μπορεί να υπάρχουν παραλλαγές ανάλογα με τον συγκεκριμένο τύπο ιστού, τις τεχνικές χρώσης και τις εφαρμογές έρευνας.
