Πώς γίνεται ορατό το DNA στο κυτταρικό λύση;
1. Κυτταρική λύση:
* Τα κύτταρα είναι σπασμένα ανοιχτά, απελευθερώνοντας το περιεχόμενό τους, συμπεριλαμβανομένου του DNA.
* Αυτό μπορεί να γίνει χρησιμοποιώντας διάφορες μεθόδους, όπως:
* απορρυπαντικά: Διαταράξτε τις κυτταρικές μεμβράνες και απελευθερώστε τα περιεχόμενα.
* ένζυμα: Σπάστε τις πρωτεΐνες, επιτρέποντας την απελευθέρωση του DNA.
* Μηχανικές μέθοδοι: Όπως η υπερήχηση ή η ξυλοδαρμό χάντρας, διαταράσσουν φυσικά τα κύτταρα.
2. Αφαίρεση κυτταρικών συντριμμιών:
* Μετά τη λύση των κυττάρων, το λύμα περιέχει ένα μείγμα κυτταρικών συστατικών.
* Για να απομονωθούν το DNA, πρέπει να αφαιρεθούν άλλα συστατικά όπως πρωτεΐνες και λιπίδια. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί μέσω:
* φυγοκέντρηση: Η περιστροφή του λύματος σε υψηλές ταχύτητες διαχωρίζει τα εξαρτήματα με βάση την πυκνότητα. Το DNA είναι συνήθως στο υπερκείμενο.
* πέψη: Ένζυμα όπως η πρωτεϊνάση Κ διασπά τις πρωτεΐνες.
* Salting-out: Προσθέτοντας αλάτι στο προϊόν λύσης, το οποίο κατακρημνίζει πρωτεΐνες αλλά αφήνει το DNA σε διάλυμα.
3. Κατακρήμνιση DNA:
* Το DNA στη συνέχεια κατακρημνίζεται από το διάλυμα, καθιστώντας το ορατό. Αυτό γίνεται συνήθως χρησιμοποιώντας αιθανόλη ή ισοπροπανόλη .
* Αυτές οι αλκοόλες είναι λιγότερο πολικές από το νερό, προκαλώντας τη συσσώρευση του DNA και σχηματίζουν ένα ορατό ίζημα.
* Η προσθήκη αλάτι μπορεί να ενισχύσει περαιτέρω τις βροχοπτώσεις εξουδετερώνοντας τα αρνητικά φορτία στο μόριο DNA.
4. Οπτικοποίηση:
* Το κατακρημνισμένο ϋΝΑ στη συνέχεια συλλέγεται, συνήθως με την περιστροφή γύρω από μια γυάλινη ράβδο ή χρησιμοποιώντας μια πιπέτα.
* Το DNA εμφανίζεται ως λευκή, stringy μάζα Επειδή είναι εξαιρετικά περιτυλιγμένο και αλληλένδετο.
Σημαντικά σημεία:
* Η διαδικασία απομόνωσης και απεικόνισης DNA μπορεί να βελτιστοποιηθεί με βάση τον τύπο κυττάρου και την προβλεπόμενη εφαρμογή.
* Διαφορετικές τεχνικές και αντιδραστήρια μπορούν να χρησιμοποιηθούν ανάλογα με τις συγκεκριμένες πειραματικές απαιτήσεις.
* Η απεικόνιση μπορεί επίσης να ενισχυθεί χρησιμοποιώντας τεχνικές χρώσης, όπως η χρήση ενός βρωμιούχου χρωστικής όπως το αιθίδιο, το οποίο δεσμεύεται με το DNA και το καθιστά φθορίζοντα κάτω από υπεριώδη φως.
Με την κατανόηση της διαδικασίας βροχόπτωσης και απεικόνισης του DNA, μπορείτε να απομονώσετε και να αναλύσετε αποτελεσματικά το DNA από διάφορες πηγές.
