Τι είναι το τριφωσφορικό dideoxyribonucleoside όταν ακολουθούμε το DNA;
Τι είναι το ddntp:
* Δομή: Το DDNTP είναι μια τροποποιημένη έκδοση ενός κανονικού τριφωσφορικού δεοξυριβονουκλεοσιδίου (DNTP), των δομικών στοιχείων του DNA. Η διαφορά έγκειται στην ομάδα 3 'υδροξυλίου στη ζάχαρη δεοξυριβόζης. Στο DDNTP, αυτή η ομάδα υδροξυλίου αντικαθίσταται με άτομο υδρογόνου.
* Λειτουργία: Αυτή η φαινομενικά μικρή αλλαγή έχει σημαντικό αντίκτυπο. Η 3 'υδροξυλομάδα είναι απαραίτητη για την πολυμεράση DNA για να προσθέσει το επόμενο νουκλεοτίδιο στην αλυσίδα. Χωρίς αυτό, η πολυμεράση DNA δεν μπορεί να δημιουργήσει έναν δεσμό φωσφοδιεστέρα και η αλυσίδα τερματίζεται.
Πώς χρησιμοποιείται το DDNTP σε αλληλουχία:
1. Αντιγραφή DNA: Η αντίδραση αλληλουχίας ξεκινά με έναν κλώνο DNA προτύπου και ένα αστάρι.
2. ενσωμάτωση DDNTP: Η ϋΝΑ πολυμεράση προσθέτει DNTPs στην αναπτυσσόμενη αλυσίδα, αντιγράφοντας το κλώνο προτύπου. Ωστόσο, η αντίδραση περιέχει επίσης μια μικρή ποσότητα DDNTPs, ειδικά επισημασμένη με διαφορετικές φθορίζουσες βαφές ανάλογα με τη βάση (A, C, G ή T).
3. Τερματισμός αλυσίδας: Όταν ένα DDNTP ενσωματώνεται στην αναπτυσσόμενη αλυσίδα, τερματίζει την αλυσίδα επειδή η ϋΝΑ πολυμεράση δεν μπορεί να προσθέσει άλλο νουκλεοτίδιο. Αυτό δημιουργεί μια σειρά από θραύσματα DNA με διαφορετικά μήκη, το καθένα τελειώνει με ένα συγκεκριμένο DDNTP.
4. Διαχωρισμός και ανίχνευση: Τα θραύσματα διαχωρίζονται στη συνέχεια κατά μέγεθος χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση, με μικρότερα θραύσματα να κινούνται ταχύτερα μέσω του πηκτώματος. Καθώς τα θραύσματα περνούν ανιχνευτή, η φθορίζουσα βαφή που συνδέεται με το DDNTP στο τέλος κάθε θραύσματος αναγνωρίζεται, αποκαλύπτοντας την αλληλουχία του DNA.
Συνοπτικά:
* Οι DDNTPs είναι οι τερματοφύλακες της αλυσίδας στην αλληλουχία Sanger, ενεργώντας ως "σημεία διακοπής" κατά τη διάρκεια της αντιγραφής του DNA.
* Είναι ετικέτα με φθορίζουσες βαφές για να αναγνωρίσουν τη βάση που αντιπροσωπεύουν.
* Αυτό επιτρέπει στους επιστήμονες να διαβάζουν την ακολουθία του DNA αναλύοντας τα διαφορετικά μήκη των τερματισμένων θραυσμάτων.
Επιτρέψτε μου να ξέρω αν έχετε άλλες ερωτήσεις σχετικά με την αλληλουχία DNA ή το DDNTPS!
