Γιατί τα παλαιότερα βακτηριακά κύτταρα είναι πιο εύκολα αποχρωματισμένα από τις νεότερες αποικίες;
* Ακεραιότητα κυτταρικού τοιχώματος: Τα νεότερα βακτηριακά κύτταρα έχουν ένα παχύτερο, πιο ισχυρό κυτταρικό τοίχωμα. Αυτό ισχύει ιδιαίτερα για τα θετικά με Gram βακτήρια, τα οποία έχουν ένα παχύ στρώμα πεπτιδογλυκάνης. Καθώς τα κύτταρα γερνούν, τα κυτταρικά τους τοιχώματα μπορούν να υποβαθμιστούν, να γίνουν λεπτότερα και πιο διαπερατά. Αυτό μπορεί να κάνει τα παλαιότερα κύτταρα λιγότερο Ανθεκτικό στην αποχρωματισμό, καθώς η βαφή μπορεί να διεισδύσει πιο εύκολα.
* χρώση γραμμάρια: Η χρώση Gram είναι μια κοινή τεχνική που χρησιμοποιείται για τη διαφοροποίηση των βακτηρίων με βάση τη δομή του κυτταρικού τοιχώματος. Τα θετικά με Gram βακτήρια διατηρούν τον κύριο λεκέ (κρυσταλλικό ιώδες) μετά την αποχρωματισμό, που εμφανίζονται μοβ. Τα Gram-αρνητικά βακτήρια έχουν ένα λεπτότερο τοίχωμα κυτταρικού και χάνουν το κρυστάλλινο λεκέ, παίρνοντας το αντίθετο (Safranin) και εμφανίζονται ροζ.
* Διαδικασία αποχρωματισμού: Ο παράγοντας αποχρωματισμού, τυπικά αλκοόλ ή ακετόνη, χρησιμοποιείται για την απομάκρυνση του κύριου λεκέ από τα Gram-αρνητικά βακτήρια. Σε παλαιότερα κύτταρα, το κυτταρικό τοίχωμα μπορεί να αποδυναμωθεί, καθιστώντας ευκολότερη τη διείσδυση του αποχρωματιστή και την απομάκρυνση του λεκέ, ενδεχομένως να τους εμφανιστούν Gram-αρνητικές.
Ωστόσο, υπάρχουν άλλοι παράγοντες που μπορούν να επηρεάσουν την αποχρωματισμό:
* Βακτηριακά είδη: Διαφορετικά βακτηριακά είδη έχουν διαφορετικές συνθέσεις και πάχους κυτταρικού τοιχώματος, τα οποία μπορούν να επηρεάσουν την ευαισθησία τους σε αποχρωματισμό.
* Προϋποθέσεις ανάπτυξης: Παράγοντες όπως η διαθεσιμότητα θρεπτικών ουσιών, η θερμοκρασία και το ρΗ μπορούν να επηρεάσουν την ακεραιότητα και την αποχρωματισμό του κυτταρικού τοιχώματος.
* Χρόνος αποχρωματισμού: Η παρατεταμένη έκθεση στον αποχρωματιστή μπορεί να οδηγήσει σε αυξημένη αποχρωματισμό, ανεξάρτητα από την ηλικία των κυττάρων.
Συνοπτικά: Ενώ η ακεραιότητα του κυτταρικού τοιχώματος των παλαιότερων κυττάρων μπορεί να διακυβευτεί, οδηγώντας σε αυξημένη διαπερατότητα, δεν είναι καθολικός κανόνας ότι είναι πιο εύκολα αποχρωματισμένοι. Πολλοί άλλοι παράγοντες παίζουν ρόλο στη διαδικασία αποχρωματισμού.