Ποιες χημικές ουσίες και μόρια χρειάζονται για την PCR Ποια είναι η συνάρτηση κάθε συστατικού;
εξαρτήματα PCR και τις λειτουργίες τους:
1. Πρότυπο DNA:
* Λειτουργία: Η ακολουθία DNA που θέλετε να ενισχύσετε. Χρησιμεύει ως σχέδιο για το ένζυμο πολυμεράσης για αντιγραφή.
2. Εκκινητές:
* Λειτουργία: Σύντομες, μονοκλωνικές αλληλουχίες ϋΝΑ (τυπικά 18-30 νουκλεοτίδια) που συμπληρώνουν συγκεκριμένες περιοχές του προτύπου DNA. Συνδέονται με το DNA του προτύπου και παρέχουν ένα σημείο εκκίνησης για την πολυμεράση DNA.
3. ΫΝΑ πολυμεράση:
* Λειτουργία: Ένα ένζυμο που συνθέτει νέους κλώνους DNA χρησιμοποιώντας το DNA του προτύπου και τους εκκινητές. Προσθέτει νουκλεοτίδια στο 3 'άκρο του εκκινητή σε κατεύθυνση 5' έως 3 '.
4.
* Λειτουργία: Δομικά στοιχεία DNA. Αποτελούνται από τέσσερις τύπους:DATP, DCTP, DGTP και DTTP, τα οποία αντιπροσωπεύουν τις τέσσερις βάσεις (αδενίνη, κυτοσίνη, γουανίνη και θυμίνη). Η πολυμεράση ϋΝΑ χρησιμοποιεί αυτά για να συναρμολογήσει τα νέα κλώνοι DNA.
5. Λύση buffer:
* Λειτουργία: Περιέχει άλατα και ιόντα που διατηρούν το κατάλληλο ρΗ και ιοντική αντοχή για τη βέλτιστη δραστικότητα πολυμεράσης DNA.
6. Χλωριούχο μαγνήσιο (MGCL2):
* Λειτουργία: Ένας συμπαράγοντας για πολυμεράση DNA, που απαιτείται για την καταλυτική του δραστικότητα. Βοηθά επίσης στη σταθεροποίηση της δομής DNA.
7. Νερό:
* Λειτουργία: Διαλύτης για την αντίδραση και παρέχει ένα μέσο για την αλληλεπίδραση των εξαρτημάτων.
Εδώ είναι μια σύντομη περίληψη της διαδικασίας PCR:
1. Μετουσίωση: Το μίγμα της αντίδρασης θερμαίνεται στους 94-98 ° C, το οποίο διαχωρίζει το DNA διπλά έλικας σε μεμονωμένους κλώνους.
2. ανόπτηση: Η θερμοκρασία μειώνεται στους 50-65 ° C, επιτρέποντας στους εκκινητές να δεσμεύονται στις συμπληρωματικές αλληλουχίες τους στο μονόκλωνο DNA του προτύπου.
3. Επέκταση: Η θερμοκρασία αυξάνεται στους 72 ° C, τη βέλτιστη θερμοκρασία για την πολυμεράση DNA. Η πολυμεράση επεκτείνει τους εκκινητές, προσθέτοντας DNTPs για τη δημιουργία νέων κλώνων DNA.
Αυτά τα τρία βήματα επαναλαμβάνονται για πολλαπλούς κύκλους, με αποτέλεσμα την εκθετική ενίσχυση της αλληλουχίας DNA στόχου.
