Ποια είναι η αρχή της αφυδρογονάσης γλυκόζης-6-φωσφορικής;
Η αρχή της δοκιμασίας της γλυκόζης-6-φωσφορικής αφυδρογονάσης (G6PD) βασίζεται στην ενζυματική αντίδραση που καταλύεται από το G6PD. Το G6PD είναι ένα ένζυμο που διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στην οδό φωσφορικής πεντόζης, μια μεταβολική οδό που είναι υπεύθυνη για τη δημιουργία NADPH, με αναγωγικού παράγοντα.
Σε αυτή τη δοκιμασία, το G6PD καταλύει την οξείδωση της γλυκόζης-6-φωσφορικής (G6P) σε 6-φωσφογλυκονικό (6-PG) χρησιμοποιώντας NADP+ ως δέκτη ηλεκτρονίων. Κατά τη διάρκεια αυτής της αντίδρασης, το NADP+ μειώνεται σε NADPH, το οποίο παρουσιάζει ισχυρή απορρόφηση στα 340 nm. Με τη μέτρηση της αύξησης της απορρόφησης στα 340 nm με την πάροδο του χρόνου, η ενζυμική δραστικότητα του G6PD μπορεί να ποσοτικοποιηθεί.
Ακολουθούν τα βασικά βήματα που εμπλέκονται στη δοκιμασία G6PD:
1. Προετοιμασία δείγματος: Ένα δείγμα που περιέχει G6PD, όπως ένα κυτταρικό λύμα ή ομογενοποιημένο ιστό, παρασκευάζεται.
2. Μείγμα αντίδρασης: Το μίγμα της αντίδρασης περιλαμβάνει τυπικά G6P, NADP+, ένα ρυθμιστικό διάλυμα και το δείγμα που περιέχει G6PD.
3. επώαση: Το μίγμα της αντίδρασης επωάζεται σε συγκεκριμένη θερμοκρασία και ρΗ, επιτρέποντας την εμφάνιση της ενζυματικής αντίδρασης.
4. φασματοφωτομετρική μέτρηση: Η απορρόφηση του μίγματος της αντίδρασης μετράται στα 340 nm χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο. Αυτή η ανάγνωση απορρόφησης αντιστοιχεί στην ποσότητα του NADPH που παράγεται.
5. Υπολογισμοί: Η μεταβολή της απορρόφησης στα 340 nm με την πάροδο του χρόνου χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό της ενζυμικής δραστικότητας του G6PD. Αυτός ο υπολογισμός θεωρεί τον συντελεστή εξαφάνισης του NADPH και τον όγκο του μίγματος της αντίδρασης.
6. Μονάδες ενζυμικής δραστηριότητας: Η δραστηριότητα G6PD εκφράζεται συνήθως σε μονάδες ανά λίτρο (U/L) ή διεθνείς μονάδες ανά λίτρο (IU/L), όπου μία μονάδα ενζυμικής δραστηριότητας αντιπροσωπεύει την ποσότητα του ενζύμου που απαιτείται για την παραγωγή 1 μικρομόλη NADPH ανά λεπτό κάτω από τις καθορισμένες συνθήκες προσδιορισμού.
Η μέτρηση της δραστηριότητας G6PD έχει κλινική σημασία, καθώς οι ελλείψεις στο G6PD μπορούν να οδηγήσουν σε μια κατάσταση γνωστή ως ανεπάρκεια G6PD, η οποία προκαλεί αιμολυτική αναιμία όταν εκτίθεται σε ορισμένα φάρμακα ή ουσίες. Οι δοκιμασίες G6PD εκτελούνται για τη διάγνωση της ανεπάρκειας G6PD και την παρακολούθηση της ενζυμικής δραστηριότητας σε άτομα με την κατάσταση.
