Τι θα χρειαζόταν να καθορίσετε εάν τα βακτήρια που αναπτύσσονται σε μια πλάκα Petri από το βάζο ζυθοποιίας είναι αναερόβια;
Κατανόηση αναερόβια βακτηρίδια
Τα αναερόβια βακτήρια είναι οργανισμοί που μπορούν να επιβιώσουν και να αναπτυχθούν ελλείψει οξυγόνου. Μπορεί ακόμη και να βλάψουν ή να σκοτωθούν από την παρουσία οξυγόνου.
Μέθοδοι για τον προσδιορισμό της αναερόβιας φύσης
1. Τεχνικές καλλιέργειας:
* Αναερόβιο βάζο/θάλαμο: Η πιο συνηθισμένη και αξιόπιστη μέθοδος.
* Τοποθετήστε την πλάκα Petri σε ένα σφραγισμένο αναερόβιο βάζο ή θάλαμο.
* Αφαιρέστε το οξυγόνο από το θάλαμο χρησιμοποιώντας ένα χημικό πακέτο (π.χ. ένα σύστημα δημιουργίας αερίου όπως το Gaspak) ή με την έκπλυση του θαλάμου με αέριο αζώτου.
* Εάν τα βακτήρια αναπτυχθούν καλά μέσα στο αναερόβιο περιβάλλον, υποδηλώνει έντονα ότι είναι αναερόβια.
* Βαθιά καλλιέργεια άγαρ:
* Προετοιμάστε ένα βαθύ σωλήνα άγαρ ή πλάκα.
* Εισάγετε τα βακτήρια στο άγαρ, εξασφαλίζοντας ότι τα βακτήρια βρίσκονται μόνο στο κάτω μέρος του σωλήνα ή του άγαρ όπου τα επίπεδα οξυγόνου είναι χαμηλά.
* Εάν η ανάπτυξη βρίσκεται μόνο στο κάτω μέρος του σωλήνα, υποδεικνύει αναερόβια ανάπτυξη.
2. Δείκτες:
* Resazurin: Αυτή η χημική ουσία είναι ένας δείκτης οξειδοαναγωγής που αλλάζει το χρώμα παρουσία οξυγόνου.
* Προσθέστε μια μικρή ποσότητα resazurin στα μέσα καλλιέργειας σας.
* Εάν τα μέσα παραμένουν ροζ (μειωμένη μορφή), υποδηλώνει ένα αναερόβιο περιβάλλον και τα βακτήρια είναι πιθανώς αναερόβια. Εάν γίνει μπλε (οξειδωμένη μορφή), υπάρχει οξυγόνο.
3. Βιοχημικές δοκιμές:
* Δοκιμή αναγωγάσης νιτρικού άλατος: Ορισμένα αναερόβια βακτήρια χρησιμοποιούν νιτρικά άλατα ως δέκτη ηλεκτρονίων απουσία οξυγόνου. Ένα θετικό αποτέλεσμα σε αυτή τη δοκιμή υποδεικνύει τη δυνατότητα μείωσης των νιτρικών σε νιτρώδη.
* Δοκιμή καταλάσης: Τα αναερόβια βακτήρια συνήθως στερούνται της καταλάσης ενζύμου, η οποία διασπά το υπεροξείδιο του υδρογόνου. Μια δοκιμή αρνητικής καταλάσης υποδηλώνει τον αναερόβιο μεταβολισμό.
Σημαντικές εκτιμήσεις:
* Πλάκες ελέγχου: Χρησιμοποιείτε πάντα πλάκες ελέγχου (τόσο αερόβια όσο και αναερόβια) για σύγκριση. Αυτό εξασφαλίζει ότι τα αποτελέσματά σας είναι έγκυρα.
* Μικροσκοπική εξέταση: Αν και δεν είναι καθοριστική, η παρατήρηση της μορφολογίας των βακτηρίων μπορεί να προσφέρει συμβουλές. Ορισμένα αναερόβια βακτήρια έχουν διακριτικά σχήματα (π.χ. Clostridia έχουν σχήμα ράβδου και συχνά σχηματίζουν σπόρια).
* Πρόσθετες δοκιμές: Οι πιο πολύπλοκες δοκιμές, όπως η ανάλυση του βακτηριακού γονιδιώματος ή η ανάλυση της αλυσίδας μεταφοράς ηλεκτρονίων, μπορούν να παρέχουν περαιτέρω επιβεβαίωση του αναερόβιου μεταβολισμού.
Αποποίηση:
Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι ενώ αυτές οι μέθοδοι μπορούν να βοηθήσουν στον προσδιορισμό της πιθανής αναερόβιας φύσης των βακτηρίων σας, μπορεί να μην είναι καθοριστικές. Για ακριβή αναγνώριση και περαιτέρω μελέτη, ίσως χρειαστεί να συμβουλευτείτε έναν μικροβιολόγο ή να χρησιμοποιήσετε πιο εξειδικευμένες τεχνικές.
