Πώς μπορεί να ληφθεί ένας κλώνος μεμονωμένων κυττάρων από μια κουλτούρα;
Μέθοδοι για την απόκτηση κλώνων ενός κυττάρου
1. κλωνοποίηση αραίωσης (περιορισμένη αραίωση)
- Αρχή: Αραίωση της εναιώρησης κυττάρων σε μια αρκετά χαμηλή συγκέντρωση, τα μεμονωμένα κύτταρα διαχωρίζονται και τοποθετούνται σε μεμονωμένα πηγάδια ή σημεία.
- Διαδικασία:
- 1. Προετοιμασία: Προσδιορίστε την κατά προσέγγιση συγκέντρωση κυττάρων της καλλιέργειας σας χρησιμοποιώντας ένα αιμοκυτταρόμετρο ή έναν μετρητή κυττάρων.
- 2. Αραίωση: Υπολογίστε τον συντελεστή αραίωσης που απαιτείται για την επίτευξη μιας επιθυμητής πυκνότητας κυττάρων (π.χ. 1 κύτταρο ανά φρεάτιο). Αραιώστε ανάλογα την ανάρτηση κυττάρων σας.
- 3. Επιμελητήριο: Πλάκα τα αραιωμένα κύτταρα σε μια πλάκα πολλαπλών φρεατίων (96 φρεατίες, 24 φρεατίες κλπ.) Ή σε ένα πιάτο Petri.
- 4. Επώαση: Αφήστε τα κύτταρα να αναπτυχθούν και να σχηματίσουν αποικίες.
- 5. Επιλογή: Προσδιορίστε πηγάδια ή περιοχές με μεμονωμένες αποικίες (ένα κελί προκάλεσε ολόκληρη την αποικία).
2. Μικροδιαχείριση (μικροσκοπική επιλογή)
- Αρχή: Χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο και έναν μικροδιακυκτικό για να παραλάβετε ένα μόνο κελί και να το μεταφέρετε σε ένα νέο μέσο ανάπτυξης.
- Διαδικασία:
- 1. Προετοιμασία: Χρησιμοποιήστε ένα μικροσκόπιο με μικροεπεξεργαστή.
- 2. Επιλογή κυττάρων: Προσδιορίστε ένα μόνο κύτταρο ενδιαφέροντος κάτω από το μικροσκόπιο.
- 3. Απομόνωση: Χρησιμοποιήστε προσεκτικά τον μικροεπιστημόριο για να παραλάβετε το κελί.
- 4. Μεταφορά: Μεταφέρετε το κελί σε ένα νέο μέσο ανάπτυξης (π.χ. ένα μικρό πιάτο καλλιέργειας ή ένα μικροσωλήνα).
- 5. Επώαση: Αφήστε το κελί να εξελιχθεί σε αποικία.
3. Διαλογή βασισμένη σε κυτταρομετρία ροής
- Αρχή: Χρησιμοποιώντας ένα κυτταρόμετρο ροής για την ταξινόμηση των κυττάρων με βάση συγκεκριμένα χαρακτηριστικά (π.χ. μέγεθος, φθορισμό).
- Διαδικασία:
- 1. Ετικέτα: Εάν είναι απαραίτητο, κύτταρα ετικετών με φθορίζοντες δείκτες για να τα διαφοροποιήσουν από άλλους.
- 2. Ταξινόμηση: Εκτελέστε την εναιώρημα κυττάρων μέσω του κυτταρομετρικού ροής. Το όργανο αναλύει και διαχωρίζει τα κύτταρα με βάση τις καθορισμένες παραμέτρους.
- 3. Συλλογή: Συλλέξτε κύτταρα ενδιαφέροντος σε ένα νέο μέσο ανάπτυξης.
- 4. Επώαση: Αφήστε τα κύτταρα να αναπτυχθούν σε αποικίες.
Σκέψεις για κλωνοποίηση ενός κυττάρου
* Τύπος κυττάρου: Οι διαφορετικοί τύποι κυττάρων έχουν διαφορετικά χαρακτηριστικά ανάπτυξης. Μερικοί είναι πιο ευαίσθητοι στην απομόνωση από άλλες.
* Μέσα ανάπτυξης: Η επιλογή του μέσου καλλιέργειας είναι κρίσιμη για την υποστήριξη της ανάπτυξης ενός κυττάρου.
* Καθαρότητα κλώνου: Βεβαιωθείτε ότι οι επιλεγμένες αποικίες προέρχονται από ένα μόνο κελί.
* Ώρα: Η κλωνοποίηση μπορεί να πάρει χρόνο, καθώς τα μεμονωμένα κύτταρα πρέπει να πολλαπλασιάσουν σε αποικία.
* Εφαρμογές:
- Ανάπτυξη κυτταρικής γραμμής: Δημιουργία καθαρών κυτταρικών σειρών με συγκεκριμένες ιδιότητες.
- Έλεγχος φαρμάκων: Δοκιμάζοντας επιδράσεις φαρμάκων σε μεμονωμένα κύτταρα.
- Γενετική έρευνα: Μελετώντας την γονιδιακή έκφραση και τις μεταλλάξεις στο επίπεδο ενός κυττάρου.
Επιτρέψτε μου να ξέρω αν θέλετε περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με οποιαδήποτε από αυτές τις μεθόδους ή να έχετε ερωτήσεις σχετικά με συγκεκριμένες εφαρμογές!
