Τι είναι η ηλεκτροφόρηση στην κλωνοποίηση;
1. Ανάλυση θραυσμάτων DNA:
* Περιορισμός ενζύμου πέψη: Κατά τη διάρκεια της κλωνοποίησης, χρησιμοποιείτε ένζυμα περιορισμού για να κόψετε το DNA σας και το φορέα (πλασμίδιο) σε συγκεκριμένες αλληλουχίες. Αυτό δημιουργεί θραύσματα DNA με διαφορετικά μεγέθη.
* ηλεκτροφόρηση πηκτής: Τα θραύσματα DNA διαχωρίζονται στη συνέχεια με βάση το μέγεθός τους χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση πηκτής. Χρησιμοποιείται μια μήτρα πηκτής (συνήθως αγαρόζη) και εφαρμόζεται ένα ηλεκτρικό ρεύμα. Μικρότερα θραύσματα ταξιδεύουν ταχύτερα και μακρύτερα μέσα από το πήκτωμα από τα μεγαλύτερα θραύσματα.
* Οπτικοποίηση: Τα θραύσματα ϋΝΑ απεικονίζονται χρησιμοποιώντας μια βαφή που δεσμεύεται με DNA και φθορίζοντες κάτω από υπεριώδη φως. Αυτό σας επιτρέπει να δείτε τις διαφορετικές ζώνες του DNA στο πήκτωμα, που αντιπροσωπεύουν τα διαφορετικά μεγέθη θραυσμάτων DNA.
2. Χρήσεις στην κλωνοποίηση:
* επαλήθευση του περιορισμού του περιορισμού: Η ηλεκτροφόρηση βοηθά στην εξασφάλιση ότι τα ένζυμα περιορισμού έχουν μειώσει με επιτυχία το DNA σας στις σωστές θέσεις και ότι ο φορέας έχει τους σωστούς θέσεις περιορισμού για σύνδεση.
* Ανάλυση κλώνων: Μετά την σύνδεση (ενώνει το ένθετο DNA με τον φορέα), η ηλεκτροφόρηση χρησιμοποιείται για να επαληθεύσει ότι η σύνδεση ήταν επιτυχής. Μπορείτε να συγκρίνετε το μέγεθος του ανασυνδυασμένου μορίου ϋΝΑ με το αρχικό θραύσμα ϋΝΑ και τον φορέα.
* Βιβλιοθήκες προβολής: Η ηλεκτροφόρηση μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανάλυση των ένθετων DNA σε μια βιβλιοθήκη κλώνων, βοηθώντας τον εντοπισμό κλώνων με το επιθυμητό ένθετο.
Συνοπτικά: Η ηλεκτροφόρηση δεν αποτελεί μέρος της ίδιας της διαδικασίας κλωνοποίησης πυρήνα, αλλά είναι ένα βασικό αναλυτικό εργαλείο για την επαλήθευση των διαφόρων βημάτων και τη διασφάλιση ότι το πείραμα κλωνοποίησης είναι επιτυχής.
