Δοκιμή Νινυδρίνης

Όταν η νινυδρίνη (ένα χημικό μόριο που έχει τον τύπο C9H6O4 και την ονομασία IUPAC 2,2-διυδροξυβενζολο-1,3-διόνη) προστίθεται σε ένα δοκιμαστικό διάλυμα της αναλυόμενης ουσίας, το αποτέλεσμα είναι γνωστό ως συγκέντρωση νινυδρίνης. Πιστεύεται ότι η ανάπτυξη βαθύ μπλε χρώματος στην αναλυόμενη ουσία οφείλεται στην παρουσία αμμωνίας, πρωτοταγών ή δευτεροταγών αμινών ή αμινοξέων.

Δοκιμή για Νινυδρίνη

Η αμινομάδα της αναλυόμενης ουσίας έχει ως αποτέλεσμα το σχηματισμό ενός μορίου που είναι συγκρίσιμο με τη δικετοϋδρίνη. Το χρώμα αυτού του συνδυασμού είναι ένα βαθύ μπλε που μερικές φορές αναφέρεται ως μωβ του Ruhemann.

Η αμινομάδα ενός ελεύθερου αμινοξέος υποβάλλεται σε χημική αντίδραση με νινυδρίνη, η οποία έχει την ιδιότητα να δρα ως οξειδωτικός παράγοντας. Όταν εκτίθεται σε νινυδρίνη, το αμινοξύ υφίσταται οξειδωτική απαμίνωση, με αποτέλεσμα την απελευθέρωση CO2, NH3 και μιας αλδεΰδης, καθώς και το σχηματισμό υδρινδαντίνης και άλλων υποπροϊόντων της αντίδρασης (η οποία είναι μια ανηγμένη μορφή νινυδρίνης). P>

Ως αποτέλεσμα αυτής της αντίδρασης, η αμμωνία αντιδρά με ένα ακόμη μόριο νινυδρίνης, με αποτέλεσμα το σχηματισμό δικετοϋδρίνης (γνωστή και ως σύμπλοκο του Ruhemann). Το ζωηρό μπλε χρώμα οφείλεται στην παρουσία αυτής της ένωσης. Επειδή η προλίνη είναι αμινοξύ, δημιουργείται μια κίτρινη ένωση όταν η αναλυόμενη ουσία περιέχει αμινοξέα, όπως η προλίνη. Όταν χρησιμοποιείται ασπαραγίνη, το σύμπλοκο που προκύπτει έχει ένα καφέ χρώμα.

Η δοκιμή Νινυδρίνης βασίζεται στις ακόλουθες αρχές:

1. Ένα βαθύ μωβ ή μπλε χρώμα, γνωστό ως μοβ του Ruhemann, παράγεται όταν δύο μόρια της ένωσης νινυδρίνης (2,2-διυδροξυινδανο-1,3-διόνη) αντιδρούν με ένα ελεύθερο α-αμινοξύ. Ο λόγος για αυτήν την αντίδραση είναι άγνωστος.
2. Όταν χρησιμοποιείται σε αυτήν την αντίδραση, ο οξειδωτικός παράγοντας νινυδρίνη προκαλεί την απαμίνωση και την αποκαρβοξυλίωση των αμινοξέων σε υψηλή θερμοκρασία, προκαλώντας τη συνέχιση της διαδικασίας.
3. Αυτή η αντίδραση ακολουθείται από συμπύκνωση μεταξύ των ανηγμένων μορίων νινυδρίνης, της απελευθερωμένης αμμωνίας και του δεύτερου μορίου νινυδρίνης, το οποίο είναι προϊόν της πρώτης αντίδρασης.
4. Χρειάζεται όλος ο χρόνος αντίδρασης για να δημιουργηθεί το σύμπλεγμα δικετοϋδρίνης, το οποίο έχει ένα πλούσιο μοβ χρώμα στο τέλος του.
5. Αυτή η δοκιμή παράγει ένα άλας ιμινίου, το οποίο έχει κίτρινο-πορτοκαλί χρώμα, όταν ελέγχονται αμινοξέα όπως η προλίνη και η υδροξυπρολίνη.
6. Το ίδιο ισχύει για τις πρωτεΐνες που περιλαμβάνουν μια ομάδα ελεύθερης αμίνης, όπως το αμινοξύ ασπαραγίνη, το οποίο αντιδρά με το αντιδραστήριο νινυδρίνης για να δημιουργήσει ένα πορτοκαλί αποτέλεσμα.
7. Η ένταση του συμπλόκου που έχει σχηματιστεί σχετίζεται με τη συγκέντρωση αμινοξέων στο διάλυμα σχηματισμού.
8. Επιπλέον, ο τύπος του αμινοξέος που υπάρχει έχει επίδραση στο πόσο φωτεινό εμφανίζεται το χρώμα.

Διαδικασία για τη δοκιμή Νινυδρίνης

1. Πρέπει πρώτα να παρασκευαστεί ένα διάλυμα νινυδρίνης 2 τοις εκατό με διάλυση 0,2 γραμμαρίων του φαρμάκου σε 10 ml είτε αιθανόλης είτε ακετόνης. Μετά από αυτό, το διάλυμα μπορεί να χρησιμοποιηθεί.
2. Είναι απαραίτητο να παρασκευαστεί ένα διάλυμα 1 τοις εκατό του αμινοξέος (αναλύτης) σε απεσταγμένο νερό σε αυτό το σημείο. Είναι απαραίτητο να προσθέσετε μερικές σταγόνες από το διάλυμα νινυδρίνης 2 τοις εκατό σε αυτό το διάλυμα για να λειτουργήσει.
3. Είναι απαραίτητο να τοποθετήσετε τον δοκιμαστικό σωλήνα σε λουτρό ζεστού νερού για περίπου 5 λεπτά.

Συμπέρασμα 

Επομένως, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι η παρουσία αμινοξέων, η ανάπτυξη βαθύ μπλε/ιώδους χρώματος δείχνει την παρουσία τους.

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων δοκιμής Νινυδρίνης

Η αμμωνία, οι πρωτοταγείς/δευτερεύουσες αμίνες και τα αμινοξέα παράγουν ένα βαθύ μωβ χρώμα όταν εκτίθενται στο φως.

Ένα κίτρινο χρώμα δημιουργείται από τα αμινοξέα υδροξυπρολίνη και προλίνη.

Όταν χρησιμοποιείται ασπαραγίνη, παράγεται ένα καφέ χρώμα.

Υποτίθεται ότι η αναλυόμενη ουσία δεν περιλαμβάνει αμινοξέα, αμίνες ή αμμωνία εάν δεν ανιχνευθεί αλλαγή χρώματος.