Ποια είναι η διαφορά μεταξύ θερμής και ψυχρής θρυψίνης
Η κύρια διαφορά μεταξύ θερμής και ψυχρής θρυψίνης είναι ότι η θερμή θρυψίνη εμπλέκεται στην επώαση ιστών με θερμή θρυψίνη στους 36,50 °C ενώ η ψυχρή θρυψίνη εμπλέκεται στην εμβάπτιση των ιστών σε ψυχρή θρυψίνη στους 4 °C ακολουθούμενη από την επώαση στους 36,50 °C Γι . Επιπλέον, η βλάβη στα κύτταρα είναι υψηλή σε θερμή θρυψίνη, ενώ η ψυχρή θρυψίνη ελαχιστοποιεί την παρατεταμένη επίδραση της θερμής θρυψίνης στον ιστό.
Η θερμή και η ψυχρή θρυψινοποίηση είναι οι δύο τεχνικές θρυψινοποίησης, μια μέθοδος ενζυματικής διάσπασης των ιστών που χρησιμοποιείται στην πρωτογενή κυτταρική καλλιέργεια. Εδώ, η θρυψίνη είναι ένα πρωτεολυτικό ένζυμο που διασπά τις πρωτεΐνες που είναι υπεύθυνες για την προσκόλληση των κυττάρων στις καλλιέργειες.
Βασικές περιοχές που καλύπτονται
1. Τι είναι η Θερμή Τρυψίνι
– Ορισμός, Μέθοδος, Σημασία
2. Τι είναι η Ψυχρή Τρυψινοποίηση
– Ορισμός, Μέθοδος, Σημασία
3. Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της θερμής και της ψυχρής θρυψίνωσηςς
– Περίληψη κοινών χαρακτηριστικών
4. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της θερμής και της ψυχρής θρυψίνωσηςς
– Σύγκριση βασικών διαφορών
Βασικοί όροι
Πρωτεΐνες προσκόλλησης, ψυχρή θρυψίνη, ενζυματική διάσπαση, πρωτογενής κυτταρική καλλιέργεια, θρυψίνη, θερμή θρυψίνη
Τι είναι η θερμή Trypsinization
Η θερμή θρυψινοποίηση είναι ένας από τους δύο τύπους μεθόδων θρυψινοποίησης που χρησιμοποιούνται για την ενζυματική αποσύνθεση των ιστών κατά την προετοιμασία τους για πρωτογενή κυτταρική καλλιέργεια. Χρησιμοποιεί απευθείας θερμή θρυψίνη στους 36,50 °C για τη διάσπαση. Πρώτα απ 'όλα, ο τεμαχισμένος ιστός πλένεται με DBSS (διάλυμα βασικού άλατος ανατομής) και στη συνέχεια προστίθεται σε μια φιάλη με ζεστή θρυψίνη. Τα διασπασμένα κύτταρα βρίσκονται στο υπερκείμενο και σε κάθε μεσοδιαστήματα των 30 λεπτών, το περιεχόμενο της φιάλης αναδεύεται για να ανακτηθούν τα διαχωρισμένα κύτταρα. Στη συνέχεια, στο μείγμα προστίθεται φρέσκια θρυψίνη. Και, αυτή η διαδικασία μπορεί να συνεχιστεί για 3-4 ώρες κατά την ανάκτηση των διαχωρισμένων κυττάρων. Τέλος, η θρυψίνη μπορεί να αφαιρεθεί από το μείγμα με φυγοκέντρηση.
Εικόνα 1:Θερμή θρυψίνη
Επιπλέον, η θερμή θρυψίνη είναι η πιο αποτελεσματική μέθοδος συλλογής κυττάρων, καθώς χρησιμοποιεί απευθείας θερμή θρυψίνη. Επίσης, αυτή η διαδικασία μπορεί να ολοκληρωθεί μέσα σε λίγες ώρες. Ωστόσο, η απόδοση των βιώσιμων κυττάρων είναι μικρότερη λόγω της δυσμενούς επίδρασης της θερμής θρυψίνης.
Τι είναι η Ψυχρή Trypsinization
Η ψυχρή θρυψινοποίηση είναι η δεύτερη μέθοδος θρυψινοποίησης. Είναι λιγότερο αποτελεσματικό αλλά αποδίδει μεγάλη ποσότητα βιώσιμων κυττάρων. Ένα από τα μειονεκτήματα της ψυχρής θρυψίνης είναι ο χρόνος που απαιτείται για την ολοκλήρωση της διαδικασίας. Γενικά, οι παρασκευασμένοι ιστοί εμποτίζονται πρώτα με ψυχρή θρυψίνη στους 4 °C για περίπου 6-24 ώρες. Στη συνέχεια, ο ανακτημένος ιστός επωάζεται με υπολειμματική θρυψίνη στους 36,50 °C για 20-30 λεπτά. Η επαναλαμβανόμενη εισαγωγή με πιπέτα βοηθά στη διασπορά των αποσυνδεδεμένων κυττάρων.
Εικόνα 2:Ψυχρή θρυψίνη
Ωστόσο, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, ο κίνδυνος κατεστραμμένων κυττάρων λόγω της παρατεταμένης έκθεσης σε θερμή θρυψίνη είναι ελάχιστος σε αυτή τη μέθοδο. Επομένως, αυτή η μέθοδος δείχνει βελτιωμένη κυτταρική βιωσιμότητα στην καλλιέργεια. Επίσης, λόγω του κενού της φυγοκέντρησης, αυτή η μέθοδος είναι κατάλληλη για ένα συμβατικό εργαστήριο. Ωστόσο, το κύριο μειονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι ότι δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για μεγάλες ποσότητες ιστού ταυτόχρονα.
Ομοιότητες μεταξύ Warm and Cold Trypsinization
- Η θερμή και η ψυχρή θρυψινοποίηση είναι οι δύο τεχνικές θρυψινοποίησης, οι οποίες χρησιμοποιούν θρυψίνη για ενζυματική διάσπαση των πρωτεϊνών προσκόλλησης σε κυτταροκαλλιέργειες.
- Μπορούν να χρησιμοποιηθούν και οι δύο μέθοδοι κατά την προετοιμασία ιστών για πρωτογενείς κυτταρικές καλλιέργειες.
- Επιπλέον, και οι δύο μέθοδοι χρησιμοποιούν θερμή θρυψίνη στους 36,50 °C κάποια στιγμή.
- Επιπλέον, βοηθούν στην απομόνωση των κυττάρων.
Διαφορά μεταξύ θερμής και ψυχρής θρυψινοποίησης
Ορισμός
Η θερμή θρυψίνη αναφέρεται σε μία από τις δύο μεθόδους θρυψίνης που εμπλέκονται στην επώαση του ιστού με θρυψίνη στους 36,50 °C που ακολουθείται από την αφαίρεση της θρυψίνης με φυγοκέντρηση ενώ η ψυχρή θρυψίνη αναφέρεται σε η άλλη μέθοδος θρυψίνης που περιλαμβάνει το εμποτισμό με θρυψίνη στους 4 °C ακολουθούμενη από την επώαση με θρυψίνη στους 36,50 °C. Έτσι, αυτή είναι η κύρια διαφορά μεταξύ θερμής και ψυχρής θρυψίνης.
Χρήση Θερμής Τρυψίνης (36,50 °C)
Μια άλλη σημαντική διαφορά μεταξύ θερμής και ψυχρής θρυψίνης είναι ότι ο ιστός υποβάλλεται σε επεξεργασία με θερμή θρυψίνη για 3-4 ώρες σε θερμή θρυψίνη, ενώ ο ιστός επωάζεται με θερμή θρυψίνη για 20- 30 λεπτά.
Φυγοκέντρηση
Η φυγοκέντρηση είναι μια άλλη διαφορά μεταξύ θερμής και ψυχρής θρυψινοποίησης. Η φυγοκέντρηση είναι απαραίτητη στη θερμή θρυψίνη για την απομάκρυνση της θρυψίνης από το δείγμα, ενώ η φυγοκέντρηση δεν απαιτείται σε κρύα θρυψίνη.
Αποτελεσματικότητα
Επίσης, η θερμή θρυψίνη είναι πιο αποτελεσματική ενώ η ψυχρή θρυψίνη είναι λιγότερο αποτελεσματική.
Σημασία
Εξάλλου, η σημασία τους είναι μια άλλη διαφορά μεταξύ θερμής και ψυχρής θρυψίνης. Η θερμή θρυψίνη μπορεί να προκαλέσει βλάβη στα κύτταρα του ιστού, ενώ η αρνητική επίδραση της θερμής θρυψίνης έχει αφαιρεθεί στην ψυχρή θρυψίνη.
Η απόδοση των βιώσιμων κυττάρων
Η απόδοση βιώσιμων κυττάρων είναι μια άλλη διαφορά μεταξύ θερμής και ψυχρής θρυψίνης. Η θερμή θρυψίνη αποδίδει λιγότερη ποσότητα βιώσιμων κυττάρων, ενώ η απόδοση βιώσιμων κυττάρων είναι υψηλή στην ψυχρή θρυψίνη.
Ώρα
Επιπλέον, η θερμή θρυψινοποίηση απαιτεί λιγότερο χρόνο για την ολοκλήρωση της διαδικασίας ενώ η ψυχρή θρυψίνη απαιτεί περισσότερο χρόνο.
Εφαρμογές
Επιπλέον, η θερμή θρυψινοποίηση χρησιμοποιείται για ιστούς που περιέχουν εξωκυτταρική μήτρα και ινώδεις συνδετικούς ιστούς, ενώ η ψυχρή θρυψινοποίηση χρησιμοποιείται για μαλακούς ιστούς όπως τα εμβρυϊκά όργανα.
Συμπέρασμα
Η θερμή θρυψινοποίηση είναι μια μέθοδος θρυψινοποίησης, η οποία χρησιμοποιεί θερμή θρυψίνη στους 36,50 °C για τη θεραπεία του ιστού προκειμένου να υποβαθμίσει τις πρωτεΐνες προσκόλλησης. Αν και είναι μια αποτελεσματική μέθοδος ενζυματικής αποσύνθεσης των ιστών, αποδίδει λιγότερη ποσότητα βιώσιμων κυττάρων λόγω της δυσμενούς επίδρασης της θερμής θρυψίνης. Συγκριτικά, η ψυχρή θρυψίνη είναι η δεύτερη μέθοδος θρυψίνης, η οποία περιλαμβάνει εμποτισμό του ιστού με ψυχρή θρυψίνη στους 4 °C πριν από την επώαση με θερμή θρυψίνη. Αυτή η μέθοδος είναι λιγότερο αποτελεσματική, αλλά αποδίδει μεγάλο αριθμό βιώσιμων κυττάρων. Επομένως, η κύρια διαφορά μεταξύ θερμής και ψυχρής θρυψίνης είναι η χρήση θερμής θρυψίνης και η σημασία κάθε μεθόδου.
