Δύο μέθοδοι για την απόδειξη του τρόπου απομόνωσης φωτολυάσης χρησιμοποιούν το φως για την αποκατάσταση του κατεστραμμένου DNA
Αυτή η δοκιμασία μετρά την ικανότητα ενός προϊόντος απομόνωσης φωτολυάσης να επιδιορθώσει το κατεστραμμένο DNA σε εργαστηριακό περιβάλλον. Η δοκιμασία συνήθως περιλαμβάνει τα ακόλουθα βήματα:
1. Το κατεστραμμένο DNA παράγεται με εκθέτοντας το DNA σε υπεριώδη (UV) φως ή άλλους παράγοντες καταστροφής DNA.
2. Το κατεστραμμένο DNA επωάζεται με απομονωμένο προϊόν φωτολυάσης και φως του κατάλληλου μήκους κύματος.
3. Το επισκευασμένο DNA αναλύεται για τον προσδιορισμό της έκτασης της επισκευής.
Τα αποτελέσματα μιας in vitro προσδιορισμού επιδιόρθωσης DNA μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη σύγκριση της αποδοτικότητας αποκατάστασης DNA διαφορετικών απομονωθέντων φωτοολυάσης, για τη μελέτη του μηχανισμού της επισκευής DNA με τη μεσολάβηση της φωτολυάσης και για τον εντοπισμό πιθανών αναστολέων της δραστικότητας φωτολυάσης.
2. In vivo δοκιμασία φωτοαντιδρασοποίησης
Αυτή η δοκιμασία μετρά την ικανότητα ενός προϊόντος απομόνωσης φωτολυάσης να επιδιορθώσει το κατεστραμμένο DNA σε ζωντανά κύτταρα. Η δοκιμασία συνήθως περιλαμβάνει τα ακόλουθα βήματα:
1. Τα κύτταρα εκτίθενται σε υπεριώδη ακτινοβολία ή άλλους παράγοντες καταστροφής του DNA για τη δημιουργία κατεστραμμένου DNA.
2. Τα κύτταρα επωάζονται με απομονωμένο προϊόν φωτολυάσης και φως του κατάλληλου μήκους κύματος.
3. Τα κύτταρα αναλύονται για να προσδιοριστεί η έκταση της επισκευής DNA και της επιβίωσης των κυττάρων.
Τα αποτελέσματα μιας in vivo δοκιμασίας φωτοαντιδρασοποίησης μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη μελέτη του ρόλου της φωτολυάσης στην επιδιόρθωση του DNA σε ζωντανά κύτταρα και για τον εντοπισμό πιθανών εφαρμογών φωτολυάσης στη θεραπεία ασθενειών που σχετίζονται με τη βλάβη του DNA.
