Ποιες είναι οι λειτουργίες του υπερχλωρικού νατρίου σε απομόνωση γονιδιωματικού DNA από ανθρώπινο αίμα;
1. Αναστολή των DNases :Το αίμα περιέχει διάφορα ένζυμα, συμπεριλαμβανομένων των νουκλεάσων, που μπορούν να υποβαθμίσουν το DNA εάν δεν αναστέλλουν επαρκώς. Το υπερχλωρικό νάτριο λειτουργεί ως αναστολέας των DNases, ιδιαίτερα εκείνων που απαιτούν μαγνήσιο ή ασβέστιο για τη δραστηριότητά τους. Συνδέεται με αυτά τα μεταλλικά ιόντα, εμποδίζοντας έτσι να συμμετάσχουν σε αντιδράσεις που καταλύονται από ένζυμο και να προστατεύουν το DNA από την αποικοδόμηση.
2. Κατακρήμνιση πρωτεΐνης :Το υπερχλωρικό νάτριο χρησιμοποιείται συνήθως κατά τη διάρκεια του σταδίου καθίζησης πρωτεΐνης της απομόνωσης του DNA. Προστίθεται σε κυτταρικό λύση ή εναιώρημα για να προκαλέσει την καθίζηση των πρωτεϊνών, συμπεριλαμβανομένης της αιμοσφαιρίνης, η οποία είναι άφθονη στα ερυθρά αιμοσφαίρια. Η υψηλή συγκέντρωση άλατος που δημιουργείται από το υπερχλωρικό νάτριο διαταράσσει τη διαλυτότητα των πρωτεϊνών, προκαλώντας τους να συσσωματώσουν και να σχηματίζουν ένα σφαιρίδιο κατά τη φυγοκέντρηση. Αυτό επιτρέπει στο υπερκείμενο που περιέχει το DNA να διαχωρίζεται από τις κατακρημνισμένες πρωτεΐνες.
3. Βροχόπτωση νουκλεϊκού οξέος :Το υπερχλωρικό νάτριο μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για να κατακρημνίσει τα νουκλεϊνικά οξέα, συμπεριλαμβανομένου του γονιδιωματικού DNA, από το υπερκείμενο που λαμβάνεται μετά από καθίζηση πρωτεΐνης. Επιτυγχάνει αυτό μειώνοντας τη διαλυτότητα των μορίων DNA. Όταν προστίθεται αιθανόλη ή ισοπροπανόλη στο υπερκείμενο μαζί με υπερχλωρικό νάτριο, το DNA γίνεται αδιάλυτο και σχηματίζει ένα ορατό ίζημα. Αυτό το ίζημα μπορεί να συλλεχθεί με φυγοκέντρηση και να καθαριστεί περαιτέρω για να ληφθεί καθαρό γονιδιωματικό DNA.
4. Αφαίρεση μολυσματικών ουσιών :Το υπερχλωρικό νάτριο βοηθά στην απομάκρυνση μολυσματικών ουσιών όπως πρωτεΐνες, άλλα μακρομόρια και άλατα από το παρασκεύασμα DNA. Η υψηλή συγκέντρωση άλατος που επιτυγχάνεται με υπερχλωρικό νάτριο βοηθά στην αποτελεσματική βροχόπτωση των ακαθαρσιών, αφήνοντας πίσω του καθαρισμένο DNA.
5. Βελτιστοποίηση της απόδοσης DNA και της ποιότητας :Η χρήση του υπερχλωρικού νατρίου σε απομόνωση γονιδιωματικού DNA μπορεί να βελτιστοποιήσει τόσο την απόδοση όσο και την ποιότητα του εκχυλισμένου DNA. Με την αποτελεσματική αναστολή των DNases, εμποδίζει την αποικοδόμηση του DNA, εξασφαλίζοντας την ακεραιότητα και το υψηλό μοριακό βάρος του απομονωμένου DNA. Επιπλέον, η αποτελεσματική απομάκρυνση των μολυσματικών ουσιών βελτιώνει τη συνολική καθαρότητα του παρασκευάσματος του DNA, καθιστώντας την κατάλληλη για διάφορες εφαρμογές μοριακής βιολογίας κατάντη.
Συνολικά, το υπερχλωρικό νάτριο παίζει ζωτικό ρόλο στην απομόνωση του γονιδιωματικού DNA από το ανθρώπινο αίμα αναστέλλοντας τις DNases, διευκολύνοντας την πρωτεΐνη και την καθίζηση του νουκλεϊκού οξέος, την απομάκρυνση των μολυσματικών ουσιών και την ενίσχυση της ποιότητας και της απόδοσης του απομονωμένου DNA.
