Τι χρησιμοποιείτε στη μέτρηση της ηλεκτροφόρησης;

Η ηλεκτροφόρηση είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό των μορίων με βάση το φορτίο και το μέγεθος τους. Εδώ είναι τα κύρια συστατικά που χρησιμοποιούνται για τη μέτρηση στην ηλεκτροφόρηση:

1. Σύστημα ηλεκτροφόρησης:

* gel: Οι πιο συνηθισμένοι τύποι είναι η αγαρόζη και το πολυακρυλαμίδιο. Τα πηκτώματα αγαρόζης χρησιμοποιούνται για μεγαλύτερα μόρια, ενώ τα πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου χρησιμοποιούνται για μικρότερα μόρια.

* buffer: Ένα διάλυμα ηλεκτρολύτη που διεξάγει ηλεκτρική ενέργεια και διατηρεί το ρΗ του πηκτώματος.

* τροφοδοτικό: Παρέχει το ηλεκτρικό ρεύμα που οδηγεί τη μετανάστευση μορίων.

* Comb: Δημιουργεί πηγάδια στο πήκτωμα όπου φορτώνονται δείγματα.

2. Προετοιμασία δείγματος:

* δείγμα: Αυτό μπορεί να είναι DNA, RNA, πρωτεΐνες ή άλλα μόρια που θέλετε να διαχωρίσετε.

* Φόρτωση βαφής: Περιέχει μια βαφή παρακολούθησης που σας επιτρέπει να παρακολουθείτε την πρόοδο της ηλεκτροφόρησης και μια πυκνή λύση για να βοηθήσετε το δείγμα να βυθιστεί στο πηγάδι.

3. Ανίχνευση και ανάλυση:

* λεκέ: Χρησιμοποιείται για την απεικόνιση των διαχωρισμένων μορίων. Οι συνήθεις λεκέδες περιλαμβάνουν:

* βρωμιούχο αιθίδιο (ETBR) για το DNA και το RNA (φθορεύει κάτω από υπεριώδη φως)

* Coomassie μπλε για πρωτεΐνες

* Σύστημα απεικόνισης: Ένα σύστημα που μπορεί να συλλάβει και να αναλύσει το χρωματισμένο πήκτωμα, όπως ένα υπεριώδη transilluminator, το σύστημα τεκμηρίωσης πηκτής ή το σαρωτή.

* Λογισμικό: Για την ανάλυση των αποτελεσμάτων, τα μεγέθη ζώνης μέτρησης και τον υπολογισμό των μοριακών βαρών.

4. Άλλο εξοπλισμός:

* Pipettes: Χρησιμοποιείται για να φορτώσει με ακρίβεια δείγματα στα φρεάτια πηκτής.

* Micropipette: Μια μικρή πιπέτα που μετρά πολύ μικρούς όγκους υγρού.

* Γάντια: Για να προστατεύσετε τα χέρια σας από χημικά και λεκέδες.

Βασικές μετρήσεις στην ηλεκτροφόρηση:

* απόσταση μετανάστευσης: Η απόσταση που διανύθηκε από ένα μόριο από το πηγάδι μέχρι την τελική του θέση στο πήκτωμα.

* Κινητικότητα: Ένα μέτρο του πόσο γρήγορα ένα μόριο κινείται σε ένα ηλεκτρικό πεδίο.

* Μοριακό βάρος: Το μέγεθος του μορίου, το οποίο μπορεί να εκτιμηθεί με βάση την απόσταση μετανάστευσης σε σχέση με τα γνωστά πρότυπα.

* Συγκέντρωση: Η ποσότητα ενός μορίου που υπάρχει σε ένα δείγμα, το οποίο μπορεί να μετρηθεί με την ένταση της χρωματισμένης ζώνης.

Χρησιμοποιώντας αυτόν τον εξοπλισμό και ακολουθώντας τα καθιερωμένα πρωτόκολλα, οι επιστήμονες μπορούν να διαχωριστούν αποτελεσματικά και να αναλύουν βιομόρια χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση.