Ποια είναι η διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA

Η κύρια διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA είναι ότι στην άμεση ELISA, το πρωτεύον αντίσωμα συζευγνύεται απευθείας με το ένζυμο ανίχνευσης ενώ, στην έμμεση ELISA, ένα δευτερεύον αντίσωμα που είναι συμπληρωματικό του πρωτογενούς αντισώματος συζευγνύεται με το ένζυμο ανίχνευσης. Αυτό σημαίνει ότι η άμεση ELISA χρησιμοποιεί ένα μόνο αντίσωμα ενώ η έμμεση ELISA χρησιμοποιεί δύο αντισώματα.

Η άμεση και η έμμεση ELISA είναι δύο μέθοδοι ELISA (ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία) που χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση της παρουσίας συγκεκριμένου αντιγόνου ή αντισώματος στο μέσο.

Βασικές περιοχές που καλύπτονται

1. Τι είναι η Direct ELISA
     – Ορισμός, Διαδικασία, Χαρακτηριστικά
2. Τι είναι η Έμμεση ELISA
     – Ορισμός, Διαδικασία, Χαρακτηριστικά
3. Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA
     – Περίληψη κοινών χαρακτηριστικών
4. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA
     – Σύγκριση βασικών διαφορών

Βασικοί όροι

Άμεση ELISA, Ένζυμο ανίχνευσης, Έμμεση ELISA, Πρωτεύον αντίσωμα, Δευτερογενές αντίσωμα, Υπόστρωμα

Τι είναι η Direct ELISA

Η άμεση ELISA είναι μια μέθοδος ELISA που επιτρέπει την ανίχνευση του αντιγόνου με ένα ίδιο το πρωτεύον αντίσωμα συνδεδεμένο με ένζυμα. Αυτή η μέθοδος ELISA αναπτύχθηκε για πρώτη φορά Perlmann και Engvall. Θεωρείται ως η απλούστερη μορφή ELISA. Τα βήματα της άμεσης ELISA παρατίθενται παρακάτω:

1. Επίστρωση της επιφάνειας της πλάκας με το δείγμα.
2. Επώαση της πλάκας με το συζευγμένο με ένζυμο, πρωτεύον αντίσωμα,
3. Πλύσιμο για την αφαίρεση των μη δεσμευμένων αντισωμάτων από την πλάκα.
4. Προσθήκη του υποστρώματος που απαιτείται από την ενζυματική αντίδραση.
5. Ανίχνευση των σημάτων που παράγονται από την πλάκα.

Εδώ, οι δύο κύριοι τύποι ενζύμων που συζευγνύονται με το κύριο αντίσωμα είναι το HRP (υπεροξειδάση χρένου) και η αλκαλική φωσφατάση. Οι τρεις τύποι υποστρωμάτων που χρησιμοποιούνται μαζί με το HRP είναι το OPD (διυδροχλωρική ο-φαινυλενοδιαμίνη), το TMB (3, 3', 5, 5'-τετραμεθυλοβενζιδίνη) και το ABTS (2, 2'-Azinobis [3-αιθυλβενζοθειαζολίνη-6- σουλφονικό οξύ]-διαμμωνιακό άλας). Το υπόστρωμα που χρησιμοποιείται μαζί με την αλκαλική φωσφατάση είναι το PNPP (p-Nitrophenyl Phosphate, Dinadium Salt). Η ενζυματική αντίδραση στο υπόστρωμα προκαλεί αλλαγή χρώματος στο μέσο, ​​η οποία εξαρτάται από τον τύπο του υποστρώματος και το ένζυμο που χρησιμοποιείται για την αντίδραση. Αυτό διευκολύνει την ανίχνευση δειγμάτων με το αντιγόνο στόχο.

Εικόνα 1:Άμεση ELISA

Η άμεση ELISA είναι πιο κατάλληλη για την ανίχνευση της ποσότητας αντιγόνου υψηλού μοριακού βάρους σε ένα δείγμα. Ο μικρότερος αριθμός βημάτων σε αυτήν τη μέθοδο ELISA την καθιστά ταχύτερη ανάλυση. Ωστόσο, λόγω του κόστους και του χρόνου που ενσωματώνεται με την επισήμανση του πρωτογενούς αντισώματος με ένζυμα, η χρήση άμεσης ELISA είναι αρκετά σπάνια. Από την άλλη πλευρά, προκαλεί δυσμενείς επιπτώσεις και στο αντιγόνο-στόχο.

Τι είναι η Έμμεση ELISA

Η έμμεση ELISA είναι μια άλλη μέθοδος ELISA που χρησιμοποιεί δύο αντισώματα για την ανίχνευση:πρωτογενές και δευτερογενές αντίσωμα. Τα βήματα της έμμεσης ELISA είναι τα εξής:

1. Επίστρωση της επιφάνειας της πλάκας με το δείγμα.
2. Επώαση της πλάκας με το πρωτεύον αντίσωμα,
3. Πλύσιμο για την αφαίρεση των μη δεσμευμένων αντισωμάτων από την πλάκα.
4. Επώαση της πλάκας με το δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με το ένζυμο ανίχνευσης.
5. Πλύσιμο για την αφαίρεση των μη δεσμευμένων αντισωμάτων από την πλάκα.
6. Προσθήκη του υποστρώματος που απαιτείται από την ενζυματική αντίδραση.
7. Ανίχνευση των σημάτων που παράγονται από την πλάκα.

   Εικόνα 2:Έμμεση ELISA

Η έμμεση ELISA προχωρά μέσω δύο βημάτων δέσμευσης αντισωμάτων. Από την άλλη πλευρά, το δευτερεύον αντίσωμα είναι συζευγμένο με το ένζυμο ανίχνευσης. Γενικά, υπάρχουν πολλά δευτερεύοντα αντισώματα συζευγμένα με ένζυμα. Εδώ, το δευτερεύον αντίσωμα είναι κυρίως ένα πολυκλωνικό αντίσωμα κατά του είδους. Λόγω της διαθεσιμότητας αντισωμάτων συζευγμένων με ένζυμα, η έμμεση μέθοδος ELISA χρησιμοποιείται συχνότερα σε ανοσολογικούς προσδιορισμούς για την ανίχνευση παρασίτων, βακτηρίων και ιών. Από την άλλη πλευρά, αρκετά δευτερεύοντα αντισώματα μπορούν να συνδεθούν με το πρωτεύον αντίσωμα στην πλάκα. Επομένως, η ευαισθησία της ανάλυσης είναι πολύ υψηλή.

Ομοιότητες μεταξύ Άμεσης και Έμμεσης ELISA

• Η άμεση και η έμμεση ELISA είναι δύο μέθοδοι ELISA στις οποίες το αντιγόνο που ενδιαφέρει συνδέεται απευθείας στην πλάκα.
• Και οι δύο μέθοδοι περιλαμβάνουν την ανίχνευση της παρουσίας ενός συγκεκριμένου μορίου πρωτεΐνης σε ένα δείγμα. Αυτό το μόριο πρωτεΐνης συνδέεται απευθείας στο πιάτο.
• Πλάκες 96 φρεατίων ή σωλήνες ταινίας 8 φρεατίων χρησιμοποιούνται και στις δύο μεθόδους. Τόσο αυτές οι πλάκες όσο και οι σωλήνες αποτελούνται από πολυστυρένιο. Οι πλάκες των 96 φρεατίων παρέχουν πολλούς χώρους για τον προσδιορισμό της βέλτιστης αραίωσης για την αντίδραση. Εν τω μεταξύ, οι σωλήνες λωρίδας 8 φρεατίων είναι καλύτεροι για τις λεπτομερώς συντονισμένες αναλύσεις.

Διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA

Ορισμός

Το Direct Elisa αναφέρεται σε έναν τύπο ELISA στον οποίο το πρωτεύον αντίσωμα είναι συζευγμένο με το ένζυμο ανίχνευσης ενώ η έμμεση ELISA αναφέρεται σε έναν τύπο ELISA στον οποίο το δευτερεύον αντίσωμα είναι συζευγμένο με το ένζυμο ανίχνευσης.

Αριθμός αντισωμάτων που χρησιμοποιούνται

Η άμεση ELISA χρησιμοποιεί ένα αντίσωμα, το οποίο είναι το κύριο αντίσωμα, ενώ η έμμεση ELISA χρησιμοποιεί δύο αντισώματα, το πρωτογενές και το δευτερεύον αντίσωμα. Αυτή είναι η κύρια διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA.

Το ένζυμο ανίχνευσης είναι συνδεδεμένο με

Επιπλέον, το ένζυμο ανίχνευσης συνδέεται με το πρωτεύον αντίσωμα στην άμεση ELISA ενώ το ένζυμο ανίχνευσης συνδέεται με το δευτερεύον αντίσωμα στην έμμεση ELISA.

Ένταση σημάτων

Μια άλλη διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA είναι ότι τα σήματα που παράγονται από την άμεση ELISA είναι λιγότερο έντονα ενώ τα σήματα που παράγονται από την έμμεση ELISA είναι πιο έντονα λόγω της ενίσχυσης του σήματος.

Σήματα παρασκηνίου

Ωστόσο, η άμεση ELISA παράγει περισσότερα σήματα φόντου από την έμμεση ELISA.

Ευαισθησία

Η άμεση ELISA είναι λιγότερο ευαίσθητη ενώ η έμμεση ELISA είναι πιο ευαίσθητη. Αυτή είναι επίσης μια διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA.

Διασταυρούμενη αντιδραστικότητα

Μια άλλη διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA είναι η διασταυρούμενη αντίδραση. Δηλαδή, η διασταυρούμενη αντιδραστικότητα είναι ελάχιστη στην άμεση ELISA ενώ είναι σημαντική στην έμμεση ELISA.

Ώρα

Επιπλέον, η άμεση ELISA είναι λιγότερο χρονοβόρα λόγω λιγότερων βημάτων, ενώ η έμμεση ELISA είναι πιο χρονοβόρα λόγω των διπλασιασμένων σταδίων δέσμευσης αντισωμάτων.

Συχνότητα χρήσης

Ενώ η άμεση ELISA είναι σχετικά σπάνια, η έμμεση ELISA είναι πιο συνηθισμένη.

Συμπέρασμα

Η άμεση ELISA χρησιμοποιεί μόνο το πρωτεύον αντίσωμα για την ανίχνευση ενός συγκεκριμένου αντιγόνου. Αυτό σημαίνει ότι το πρωτεύον αντίσωμα είναι συζευγμένο με το ένζυμο ανίχνευσης στην άμεση ELISA. Όμως, η έμμεση ELISA χρησιμοποιεί ένα πρωτεύον αντίσωμα για να συνδεθεί με το αντιγόνο ενώ το συζευγμένο με ένζυμο δευτερεύον αντίσωμα συνδέεται με το πρωτεύον αντίσωμα. Η άμεση ELISA είναι λιγότερο συχνή λόγω της μικρότερης διαθεσιμότητας πρωτεύοντος αντισώματος συζευγμένου με ένζυμα. Η κύρια διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA είναι ο αριθμός των αντισωμάτων που χρησιμοποιούνται.

Αναφορά:

1. "Τύποι ELISA". Bio-Rad , Bio-Rad Laboratories, Διαθέσιμο εδώ

Εικόνα Ευγενική προσφορά:

1. "Διάγραμμα ELISA" Από την Cavitri – Δική εργασία (CC BY 3.0) μέσω Commons Wikimedia  
2. «Έμμεση ELISA» του Cawang – Δική του εργασία (CC0) μέσω Commons Wikimedia