Γιατί χρησιμοποιείτε ένζυμο κενό και υπόστρωμα αντί για ένα μόνο για να μάθετε τη δραστηριότητα;
Κατανόηση των στοιχείων:
* Ένζυμο κενό: Αυτό περιέχει τα πάντα * εκτός από το υπόστρωμα. Σκοπός του είναι να λαμβάνει υπόψη οποιαδήποτε δραστηριότητα υποβάθρου ή απορρόφηση που δεν οφείλεται στην αντίδραση ενζύμου-υποβρύου. Αυτό θα μπορούσε να περιλαμβάνει:
* Ενζυμική αυτόματη δραστηριότητα: Ορισμένα ένζυμα μπορεί να έχουν ελαφρά δραστικότητα ακόμη και ελλείψει του συγκεκριμένου υποστρώματος τους.
* Μη ενζυματικές αντιδράσεις: Το ίδιο το ρυθμιστικό διάλυμα ή άλλα συστατικά στο μίγμα αντίδρασης μπορεί να συμβάλει στις αλλαγές απορρόφησης.
* υπόστρωμα: Αυτό είναι το μόριο που το ένζυμο δρα για την παραγωγή ενός προϊόντος.
* Συνδυασμένη λύση: Αυτό θα περιλάμβανε τόσο το ένζυμο όσο και το υπόστρωμα.
Γιατί οι ξεχωριστές λύσεις είναι κρίσιμες:
1. Ακριβής μέτρηση της συγκεκριμένης αντίδρασης: Η χρήση ξεχωριστών κενών και υποστρωμάτων μας επιτρέπει να απομονώσουμε και να μετρήσουμε τη δραστηριότητα αποκλειστικά λόγω της αλληλεπίδρασης του ενζύμου με το συγκεκριμένο υπόστρωμα του. Μπορούμε να αφαιρέσουμε τη δραστικότητα υποβάθρου που μετράται στο κενό από τη συνολική δραστηριότητα που μετρήθηκε στο συνδυασμένο διάλυμα.
2. Εξάλειψη παρεμβολών: Η ανάμειξη του ενζύμου και του υποστρώματος μπορεί να οδηγήσει σε:
* Προσωπικός σχηματισμός προϊόντων: Το ένζυμο θα μπορούσε να αρχίσει να ενεργεί στο υπόστρωμα πριν αρχίσει το πείραμα, οδηγώντας σε ανακριβή αποτελέσματα.
* αποικοδόμηση ενζύμου: Το ένζυμο μπορεί να γίνει ασταθές ή ανενεργό εάν είναι προ-αναμεμειγμένο με το υπόστρωμα για μεγάλο χρονικό διάστημα.
3. Έλεγχος της αντίδρασης εκκίνησης: Με την προσθήκη του ενζύμου και του υποστρώματος χωριστά, αποκτάμε τον έλεγχο της ακριβούς στιγμής που αρχίζει η αντίδραση. Αυτό είναι απαραίτητο για τη μελέτη της κινητικής της αντίδρασης (πόσο γρήγορα προχωράει).
Παράδειγμα:
Φανταστείτε τη μέτρηση της δραστικότητας ενός ενζύμου που διασπάται ένα έγχρωμο υπόστρωμα. Εάν συνδυάσετε το ένζυμο και το υπόστρωμα, η αλλαγή χρώματος μπορεί να ξεκινήσει αμέσως, καθιστώντας δύσκολο τον προσδιορισμό του πραγματικού ρυθμού της αντίδρασης. Χρησιμοποιώντας ένα κενό για να ληφθεί υπόψη οποιοδήποτε αρχικό χρώμα και μέτρηση της αλλαγής χρώματος ειδικά λόγω της δράσης του ενζύμου στο υπόστρωμα θα παράσχει ακριβέστερα αποτελέσματα.
Συνοπτικά:
Η χρήση των ενζυμικών κενών και των υποστρωμάτων ξεχωριστά είναι ζωτικής σημασίας για ακριβείς και αξιόπιστες μετρήσεις δραστικότητας ενζύμου. Αυτή η μέθοδος εξασφαλίζει ότι μετράμε μόνο τη συγκεκριμένη δραστικότητα του ενζύμου στο υπόστρωμα του, εξαλείφοντας τις παρεμβολές και επιτρέποντας την έναρξη ελεγχόμενης αντίδρασης.
