Τι είναι η ισοηλεκτροφόρηση;

Ισοηλεκτρική εστίαση (IEF)

Πιθανότατα αναφέρεστε στο Isoelectric Focusing (IEF) , όχι "ισοηλεκτροφόρηση". Ενώ και οι δύο όροι περιλαμβάνουν ηλεκτροφόρηση, είναι ξεχωριστές:

* ηλεκτροφόρηση είναι μια γενική τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό των μορίων με βάση το φορτίο και το μέγεθος τους εφαρμόζοντας ένα ηλεκτρικό πεδίο μέσω ενός πηκτώματος ή άλλου μέσου.

* Ισοηλεκτρική εστίαση (IEF) είναι ένας εξειδικευμένος τύπος ηλεκτροφόρησης που έχει σχεδιαστεί ειδικά για να διαχωρίζει τις πρωτεΐνες με βάση το ισοηλεκτρικό σημείο τους (PI) .

Ποιο είναι το ισοηλεκτρικό σημείο (PI);

Το ισοηλεκτρικό σημείο (PI) μιας πρωτεΐνης είναι το ρΗ στο οποίο η πρωτεΐνη μεταφέρει Δεν υπάρχει καθαρό ηλεκτρικό φορτίο . Αυτό σημαίνει ότι τα θετικά και αρνητικά φορτία της πρωτεΐνης είναι ισορροπημένες. Σε τιμές ρΗ κάτω από το PI, η πρωτεΐνη θα έχει καθαρό θετικό φορτίο και θα μεταναστεύσει προς την κάθοδο (αρνητικό ηλεκτρόδιο). Αντίθετα, σε τιμές ρΗ πάνω από το PI, η πρωτεΐνη θα έχει καθαρό αρνητικό φορτίο και θα μεταναστεύσει προς την άνοδο (θετικό ηλεκτρόδιο).

Πώς λειτουργεί το IEF;

Το IEF χρησιμοποιεί κλίση pH στο πήκτωμα ή στο μέσο. Το μίγμα πρωτεΐνης εφαρμόζεται στο πήκτωμα και εφαρμόζεται ένα ηλεκτρικό πεδίο. Οι πρωτεΐνες μεταναστεύουν μέσω του πηκτώματος μέχρι να φτάσουν στο ρΗ που αντιστοιχεί στο PI τους. Σε αυτό το σημείο, γίνονται ουδέτεροι και σταματούν να μεταναστεύουν.

Αυτό έχει ως αποτέλεσμα τον διαχωρισμό των πρωτεϊνών σε ξεχωριστές ζώνες σύμφωνα με το PI τους, με πρωτεΐνες με χαμηλότερο PIS να μεταναστεύουν περαιτέρω προς την άνοδο και τις πρωτεΐνες με υψηλότερο PIS να μεταναστεύουν περαιτέρω προς την κάθοδο.

Εφαρμογές του IEF:

Το IEF είναι μια ισχυρή τεχνική που χρησιμοποιείται σε διάφορες εφαρμογές, όπως:

* Ανάλυση πρωτεΐνης :Ταυτοποίηση και χαρακτηρισμός πρωτεϊνών με βάση το PI τους.

* πρωτεϊνωματική :Μελετώντας την έκφραση των πρωτεϊνών και τις μεταβολές στην έκφραση πρωτεΐνης σε διαφορετικές συνθήκες.

* Βιοϊατρική έρευνα :Ανάλυση προφίλ πρωτεϊνών σε βιολογικά δείγματα όπως εκχυλίσματα αίματος, ούρων και ιστών.

* Επιστήμη τροφίμων :Προσδιορισμός και ποσοτικοποίηση των πρωτεϊνών στα τρόφιμα.

* Φαρμακευτικά :Ανάλυση της καθαρότητας και της σταθερότητας της πρωτεΐνης στην ανάπτυξη φαρμάκων.

Πλεονεκτήματα του IEF:

* Υψηλή ανάλυση :Το IEF προσφέρει υψηλό βαθμό ανάλυσης, επιτρέποντας τον διαχωρισμό των πρωτεϊνών με πολύ παρόμοιο PIS.

* ευαισθησία :Το IEF μπορεί να ανιχνεύσει χαμηλές συγκεντρώσεις πρωτεϊνών.

* αναπαραγωγιμότητα :Η τεχνική είναι ιδιαίτερα αναπαραγώγιμη.

Μειονεκτήματα του IEF:

* Περιορισμένο μέγεθος δείγματος :Το IEF απαιτεί σχετικά μικρούς όγκους δείγματος.

* Τεχνική πολυπλοκότητα :Το IEF απαιτεί εξειδικευμένο εξοπλισμό και τεχνογνωσία για να εκτελέσει αποτελεσματικά.

Συνοπτικά, το IEF είναι μια πολύτιμη τεχνική για τον διαχωρισμό και την ανάλυση πρωτεϊνών με βάση το PI τους, προσφέροντας υψηλή ανάλυση και ευαισθησία για διάφορες εφαρμογές.