Πώς αφαιρείται το DNA από τον οργανισμό πηγής;
1. Για απλούς οργανισμούς όπως βακτήρια:
* λύση: Αυτό περιλαμβάνει το σπάσιμο των κυττάρων που χρησιμοποιούν χημικά όπως απορρυπαντικά ή ένζυμα.
* Μηχανική διαταραχή: Αυτό μπορεί να γίνει χρησιμοποιώντας μεθόδους όπως η υπερήχηση (χρησιμοποιώντας τα ηχητικά κύματα), το χτύπημα των χάντρων (χρησιμοποιώντας μικρές χάντρες για να σπάσει τα ανοικτά κύτταρα) ή ομογενοποίηση (αναγκάζοντας κύτταρα μέσω μικρού χώρου).
* Θερμική επεξεργασία: Αυτό μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να διαταράξει την κυτταρική μεμβράνη, αλλά μπορεί επίσης να βλάψει το DNA.
2. Για πιο σύνθετους οργανισμούς όπως τα ζώα και τα φυτά:
* Ομογενοποίηση ιστών: Αυτό συνεπάγεται τη λείανση του ιστού σε μια ωραία πάστα.
* Λύση κυττάρων: Αυτό μπορεί να γίνει χρησιμοποιώντας τις μεθόδους που περιγράφηκαν παραπάνω, με την προσθήκη πρωτεϊνάσων για την αφομοίωση των πρωτεϊνών που θα μπορούσαν να παρεμβαίνουν στην εκχύλιση.
* Διαφορική φυγοκέντρηση: Αυτό περιλαμβάνει την περιστροφή του ομογενοποιημένου ιστού με διαφορετικές ταχύτητες για να διαχωριστούν τα κυτταρικά συστατικά, όπως τα οργανίδια και το DNA.
3. Ειδικές μέθοδοι απομόνωσης DNA:
* Σλάμα: Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί υψηλές συγκεντρώσεις άλατος για να καθίσει το DNA.
* Εκχύλιση φαινόλης-χλωροφόρμιο: Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί ένα μίγμα φαινόλης και χλωροφόρμιο για να διαχωρίσει το DNA από άλλα κυτταρικά συστατικά.
* Διαχωρισμός μαγνητικών σφαιριδίων: Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί μαγνητικά σφαιρίδια επικαλυμμένα με αντιδραστήριο δέσμευσης DNA για την απομόνωση του DNA.
* Χρωματογραφία στήλης: Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί μια στήλη γεμάτη με ένα υλικό που συνδέεται με το DNA για να τον καθαρίσει.
Βασικά βήματα που εμπλέκονται στις περισσότερες μεθόδους εκχύλισης DNA:
1. Διαταραχή των κυττάρων: Αυτό είναι το πρώτο βήμα για την απελευθέρωση του DNA από το κελί.
2. Αφαίρεση κυτταρικών συντριμμιών: Αυτό το βήμα περιλαμβάνει την αφαίρεση ανεπιθύμητων εξαρτημάτων όπως πρωτεΐνες και λιπίδια.
3. Κατοικίες DNA: Αυτό το βήμα χρησιμοποιεί χημικές ουσίες όπως η αιθανόλη ή η ισοπροπανόλη για να κατακρημνίσει το DNA.
4. Πλύσιμο DNA: Αυτό το βήμα αφαιρεί υπολειπόμενες ακαθαρσίες.
5. Αυτό συνεπάγεται τη διάλυση του DNA σε ένα κατάλληλο buffer.
Μετά την αφαίρεση του DNA:
* Μπορεί να αποθηκευτεί στους -20 ° C για μακροχρόνια αποθήκευση ή στους 4 ° C για βραχυπρόθεσμη αποθήκευση.
* Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για διάφορους σκοπούς όπως:
* Γενετικός έλεγχος
* Δοκιμή πατρότητας
* Ιατροδικαστική ανάλυση
* Έρευνα
Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι οι συγκεκριμένες μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για την εκχύλιση DNA ποικίλλουν ανάλογα με τον οργανισμό πηγής, τον τύπο του DNA που εξάγεται και την προβλεπόμενη χρήση του DNA.
