Πώς απομονώσετε τα βακτήρια από μικτή καλλιέργεια που περιέχει μύκητα;
Κατανόηση της πρόκλησης
Οι μύκητες και τα βακτήρια συχνά ευδοκιμούν σε παρόμοια περιβάλλοντα. Ο διαχωρισμός τους απαιτεί τεχνικές που εκμεταλλεύονται τα ξεχωριστά βιολογικά τους χαρακτηριστικά.
Μέθοδοι για απομόνωση
1. Επιλεκτικά μέσα:
* Αρχή: Οι μύκητες και τα βακτήρια έχουν διαφορετικές διατροφικές απαιτήσεις. Τα επιλεκτικά μέσα περιέχουν συστατικά που ευνοούν την ανάπτυξη ενός τύπου μικροβίου, ενώ αναστέλλουν την ανάπτυξη του άλλου.
* Παραδείγματα:
* Sabouraud Dextrose Agar (SDA): Η υψηλή περιεκτικότητα σε ζάχαρη αναστέλλει πολλά βακτήρια αλλά υποστηρίζει την ανάπτυξη μυκήτων.
* θρεπτικό άγαρ (NA): Υποστηρίζει την ανάπτυξη πολλών βακτηρίων, ενώ συχνά είναι λιγότερο κατάλληλη για τους μύκητες.
* Διαδικασία:
* Ρυθμίστε ένα μικρό δείγμα της μικτής κουλτούρας σας και στις δύο πλάκες SDA και NA.
* Επωαστείτε σε κατάλληλες θερμοκρασίες (συνήθως 25-30 ° C για μύκητες, 37 ° C για βακτήρια) για αρκετές ημέρες.
* Εξετάστε τις πλάκες για τις αποικίες. Οι μύκητες συχνά παράγουν χαρακτηριστικά μακροσκοπικά χαρακτηριστικά (όπως η ασαφής ανάπτυξη), ενώ τα βακτήρια συνήθως σχηματίζουν ομαλές, στρογγυλές αποικίες.
2. Αντιβιοτικά:
* Αρχή: Τα βακτήρια είναι ευαίσθητα σε συγκεκριμένα αντιβιοτικά, ενώ οι μύκητες είναι γενικά πιο ανθεκτικοί. Τα αντιβιοτικά μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την αναστολή της βακτηριακής ανάπτυξης.
* Διαδικασία:
* Προετοιμάστε μια πλάκα άγαρ θρεπτικών ουσιών που περιέχει ένα αντιβιοτικό που είναι αποτελεσματικό ενάντια στα βακτήρια που προσπαθείτε να εξαλείψετε.
* Ρυθμίστε την μικτή κουλτούρα σας πάνω σε αυτό το πιάτο.
* Επωάστε την πλάκα. Μόνο οι μυκητιακές αποικίες πρέπει να αναπτυχθούν.
* ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Επιλέξτε ένα αντιβιοτικό που δεν επηρεάζει σημαντικά τον μύκητα που θέλετε να μελετήσετε.
3. Μικροσκοπικές τεχνικές:
* Αρχή: Οι μύκητες και τα βακτήρια έχουν ξεχωριστά μορφολογικά χαρακτηριστικά. Τα μικροσκόπια μπορούν να τα διακρίνουν.
* Διαδικασία:
* Προετοιμάστε μια υγρή βάση ή μια βιτρό διαφάνεια της μικτής κουλτούρας σας.
* Εξετάστε το δείγμα κάτω από μικροσκόπιο. Αναζητώ:
* βακτήρια: Μικροί, μονοκύτταροι οργανισμοί με διάφορα σχήματα (ράβδοι, κοκκί, σπείρες).
* μύκητες: Μεγαλύτερες, συχνά νηματοειδείς δομές (υφές) που μπορεί να σχηματίσουν σπόρια.
* Αυτή η μέθοδος είναι χρήσιμη για τον εντοπισμό, αλλά όχι απαραίτητα διαχωρισμό των οργανισμών.
4. Τεχνικές εμπλουτισμού:
* Αρχή: Αυτό περιλαμβάνει τη δημιουργία συνθηκών που ευνοούν την ανάπτυξη των βακτηρίων που θέλετε να απομονώσετε.
* Διαδικασία:
* Προετοιμάστε ένα θρεπτικό ζωμό με συστατικά που προάγουν την ανάπτυξη βακτηρίων (π.χ., υψηλή συγκέντρωση θρεπτικών ουσιών).
* Εμβολώστε το ζωμό με την μικτή κουλτούρα σας.
* Επωάστε το ζωμό. Τα βακτήρια πιθανότατα θα πολλαπλασιάσουν ταχύτερα από τους μύκητες.
* Μόλις ο βακτηριακός πληθυσμός είναι επαρκώς υψηλός, ραβδώντας το ζωμό σε μια νέα πλάκα άγαρ θρεπτικών ουσιών.
5. εξειδικευμένες τεχνικές (για πιο σύνθετες περιπτώσεις):
* διήθηση: Εάν πρέπει να αφαιρέσετε τα μυκητιακά σπόρια ή τα μεγάλα θραύσματα μυκήτων, μπορεί να χρησιμοποιηθεί ένα αποστειρωμένο φίλτρο.
* φυγοκέντρηση: Διαχωρισμός με βάση την πυκνότητα, αλλά αυτό μπορεί να είναι δύσκολο με μικτές καλλιέργειες.
* Κυομετρία ροής: Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί λέιζερ και ανιχνευτές για τον εντοπισμό και τον διαχωρισμό μεμονωμένων κυττάρων με βάση τις ιδιότητές τους (μέγεθος, φθορισμό).
Σημαντικές εκτιμήσεις:
* στειρότητα: Διατηρήστε την αποστειρωμένη τεχνική για να αποφύγετε τη μόλυνση.
* Αναγνώριση: Μόλις έχετε υποψία βακτηριακής απομόνωσης, πρέπει να επιβεβαιώσετε την ταυτότητά του χρησιμοποιώντας τις κατάλληλες τεχνικές (π.χ. χρώση Gram, βιοχημικές δοκιμές, μοριακές μεθόδους).
* Ασφάλεια: Μερικοί μύκητες και βακτήρια μπορεί να είναι παθογόνα. Χρησιμοποιήστε τις κατάλληλες προφυλάξεις ασφαλείας κατά τον χειρισμό των πολιτισμών.
Επιτρέψτε μου να ξέρω αν χρειάζεστε πιο συγκεκριμένες συμβουλές με βάση τους τύπους βακτηρίων και μύκων με τους οποίους εργάζεστε. Μπορώ να παρέχω προσαρμοσμένες πληροφορίες!
