Μπορούν επίσης οι πρωτεΐνες να αλληλουχιζόμενες σαν νουκλεϊνικά οξέα;
νουκλεϊνικά οξέα αλληλουχίας (DNA/RNA):
* Μέθοδος: Βασίζεται κυρίως σε Sanger Sequencing ή αλληλουχία επόμενης γενιάς (NGS) . Αυτές οι μέθοδοι περιλαμβάνουν:
* κατακερματισμός: Σπάζοντας το DNA/RNA σε μικρότερα κομμάτια.
* Τερματισμός αλυσίδας: Χρησιμοποιώντας τροποποιημένα νουκλεοτίδια για να σταματήσει η σύνθεση DNA σε συγκεκριμένες θέσεις.
* Ηλεκτροφόρηση: Διαχωρισμός των θραυσμάτων κατά μέγεθος για να προσδιοριστούν η ακολουθία.
* Πληροφορίες: Παρέχει την ακριβή σειρά νουκλεοτιδίων (Α, Τ, C, G) σε μόριο DNA ή RNA.
* Πλεονεκτήματα: Υψηλή απόδοση, σχετικά φθηνή, καλή για τον εντοπισμό γενετικών μεταλλάξεων.
πρωτεΐνες αλληλουχίας (πολυπεπτίδια):
* Μέθοδος: Βασίζεται κυρίως σε φασματομετρία μάζας (MS) . Αυτή η τεχνική περιλαμβάνει:
* κατακερματισμός: Σπάζοντας την πρωτεΐνη σε μικρότερα πεπτίδια.
* ιονισμός: Δίνοντας στα πεπτίδια μια χρέωση.
* Αναλογία μάζας προς φόρτωση (m/z): Μέτρηση της αναλογίας μάζας προς φόρτιση των πεπτιδίων.
* Αναζήτηση βάσης δεδομένων: Ταιριάζουν με τις τιμές m/z σε μια βάση δεδομένων γνωστών πρωτεϊνικών αλληλουχιών.
* Πληροφορίες: Παρέχει την αλληλουχία αμινοξέων μιας πρωτεΐνης.
* Πλεονεκτήματα: Εξαιρετικά ευαίσθητο, μπορεί να εντοπίσει μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανάλυση σύνθετων μείγματα πρωτεϊνών.
Βασικές διαφορές:
* μεθοδολογία: Διαφορετικές τεχνικές χρησιμοποιούνται για πρωτεΐνες αλληλουχίας και νουκλεϊνικά οξέα.
* Πληροφορίες: Η αλληλουχία του νουκλεϊκού οξέος σας δίνει τη σειρά των νουκλεοτιδίων, ενώ η αλληλουχία πρωτεϊνών σας δίνει τη σειρά αμινοξέων.
* πολυπλοκότητα: Η αλληλουχία πρωτεϊνών είναι γενικά πιο πολύπλοκη και μπορεί να επηρεαστεί από μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις.
Συνοπτικά, τόσο τα νουκλεϊνικά οξέα όσο και οι πρωτεΐνες μπορούν να προσβληθούν, αλλά οι μέθοδοι και οι πληροφορίες που λαμβάνονται διαφέρουν σημαντικά.
