Ένας επιστήμονας θέλει να εισαγάγει νέο γονίδιο σε ένα βακτήριο Ποιο είναι το πρώτο βήμα σε αυτή τη διαδικασία;
1. Απομόνωση γονιδίων:
* Προσδιορίστε το γονίδιο: Ο επιστήμονας πρέπει πρώτα να γνωρίζει το συγκεκριμένο γονίδιο που θέλουν να εισαγάγουν. Αυτό μπορεί να περιλαμβάνει αναζήτηση βάσεων δεδομένων γνωστών γονιδίων ή διεξαγωγής πειραμάτων για τον προσδιορισμό του γονιδίου που είναι υπεύθυνο για ένα επιθυμητό χαρακτηριστικό.
* Αποκτήστε το γονίδιο: Το γονίδιο μπορεί να ληφθεί από διάφορες πηγές:
* κλωνοποίηση από άλλο οργανισμό: Το γονίδιο μπορεί να ενισχυθεί (αντιγραφεί) από διαφορετικό οργανισμό χρησιμοποιώντας τεχνικές όπως η PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης).
* Σύνθεση του γονιδίου: Εάν η αλληλουχία γονιδίων είναι γνωστή, μπορεί να συντεθεί τεχνητά σε ένα εργαστήριο.
2. Προετοιμασία φορέα:
* Επιλέξτε ένα κατάλληλο διάνυσμα: Ένας φορέας είναι ένα μόριο φορέα που παραδίδει το γονίδιο στο βακτηριακό κύτταρο. Οι συνήθεις φορείς περιλαμβάνουν πλασμίδια (μικρά, κυκλικά μόρια DNA) ή ιούς (βακτηριοφάγους).
* τροποποιήστε το διάνυσμα: Ο φορέας τροποποιείται ώστε να περιλαμβάνει μια ειδική ακολουθία που ονομάζεται "site περιορισμού" όπου μπορεί να εισαχθεί το γονίδιο ενδιαφέροντος. Αυτό συχνά περιλαμβάνει την κοπή του φορέα με συγκεκριμένα ένζυμα (ένζυμα περιορισμού) που αναγνωρίζουν και κόβουν το DNA σε συγκεκριμένες θέσεις.
3. Εισαγωγή γονιδίων (σύνδεση):
* Συνδυάστε το γονίδιο και το διάνυσμα: Το απομονωμένο γονίδιο και ο φορέας κοπής αναμειγνύονται μαζί παρουσία ενός ενζύμου που ονομάζεται Ligase DNA.
* σύνδεση: Η λιγάση DNA ενώνει τα άκρα του γονιδίου και του φορέα, δημιουργώντας ένα ανασυνδυασμένο μόριο DNA.
Μόλις δημιουργηθεί το ανασυνδυασμένο μόριο DNA, τα επόμενα βήματα περιλαμβάνουν την εισαγωγή του σε βακτήρια (μετασχηματισμός) και επιλέγοντας τα βακτήρια που έχουν πάρει με επιτυχία το νέο γονίδιο.
