Ποιο ένζυμο χρησιμοποιήσαμε για να φτιάξουμε ραδιενεργά ετικέτα DNA;
Δείτε πώς λειτουργεί:
1. ϋΝΑ πολυμεράση είναι ένα ένζυμο που αναπαράγει το DNA, δημιουργώντας ένα νέο σκέλος συμπληρωματικό σε ένα πρότυπο κλώνου.
2. Ραδιενεργά επισημασμένα νουκλεοτίδια (DNTPs) παρέχονται ως δομικά στοιχεία για το νέο κλώνο DNA. Αυτά τα DNTPs περιέχουν ραδιενεργά ισότοπα, όπως το ³²p ή το "Η, ενσωματωμένα στη δομή τους.
3. Καθώς η ϋΝΑ πολυμεράση επαναλαμβάνει το κλώνο προτύπου, ενσωματώνει αυτά τα επισημασμένα νουκλεοτίδια στον νεοσυσταθείσα κλώνο, με αποτέλεσμα το ραδιενεργά επισημασμένο DNA .
Υπάρχουν διαφορετικοί τύποι πολυμεράσων ϋΝΑ που χρησιμοποιούνται σε διάφορες τεχνικές, όπως:
* θραύσμα Klenow: Μια τροποποιημένη μορφή πολυμεράσης ϋΝΑ, που χρησιμοποιείται για την επισήμανση θραυσμάτων ϋΝΑ με ραδιενεργούς ανιχνευτές.
* TAQ πολυμεράση: Ένα θερμοσταθετό ένζυμο που χρησιμοποιείται σε PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) για την ενίσχυση του DNA, επιτρέποντας την ενσωμάτωση επισημασμένων νουκλεοτιδίων στο ενισχυμένο προϊόν.
Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι άλλα ένζυμα μπορεί να εμπλέκονται στη διαδικασία, όπως:
* Ένζυμα περιορισμού Για να κόψετε το DNA σε συγκεκριμένα θραύσματα για επισήμανση.
* Λιγάσης για να συμμετάσχετε σε ετικέτα θραύσματα DNA σε άλλα μόρια.
Η επιλογή του συγκεκριμένου ενζύμου και της τεχνικής εξαρτάται από το επιθυμητό αποτέλεσμα και την ειδική εφαρμογή του ραδιενεργά επισημασμένου DNA.
