Τι είναι μια χημική δοκιμή για την πρωτεΐνη;

Υπάρχουν αρκετές χημικές δοκιμές που χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση της παρουσίας πρωτεϊνών, το καθένα με τα δικά του πλεονεκτήματα και τους περιορισμούς. Εδώ είναι μερικά από τα πιο συνηθισμένα:

1. Δοκιμή Biuret:

* Αρχή: Αυτή η δοκιμή ανιχνεύει την παρουσία πεπτιδικών δεσμών, οι οποίοι είναι οι δεσμοί μεταξύ αμινοξέων σε πρωτεΐνες.

* Διαδικασία:

* Προσθέστε μερικές σταγόνες αντιδραστηρίου Biuret (διάλυμα θειικού χαλκού σε ισχυρό αλκάλιο) στο δείγμα.

* Ένα χρώμα βιολετί-μπλε δείχνει ένα θετικό αποτέλεσμα, επιβεβαιώνοντας την παρουσία πρωτεϊνών.

* Πλεονεκτήματα: Σχετικά ευαίσθητο και ευρέως χρησιμοποιούμενο.

* Μειονεκτήματα: Δεν είναι ειδικά για τις πρωτεΐνες, καθώς άλλες ενώσεις που περιέχουν πεπτιδικούς δεσμούς μπορεί επίσης να δώσουν μια θετική αντίδραση.

2. Δοκιμή ninhydrin:

* Αρχή: Αυτή η δοκιμή ανιχνεύει την παρουσία α-αμινο-ομάδων, οι οποίες υπάρχουν σε όλα τα αμινοξέα.

* Διαδικασία:

* Ζεσταίνετε το δείγμα με αντιδραστήριο ninhydrin.

* Ένα πορφυρό-μπλε χρώμα υποδεικνύει ένα θετικό αποτέλεσμα, υποδεικνύοντας την παρουσία ελεύθερων αμινομάδων.

* Πλεονεκτήματα: Πολύ ευαίσθητο και μπορεί να ανιχνεύσει πολύ μικρές ποσότητες αμινοξέων.

* Μειονεκτήματα: Δεν είναι συγκεκριμένες για πρωτεΐνες, όπως άλλες ενώσεις που περιέχουν α-αμινο ομάδες μπορούν επίσης να αντιδράσουν.

3. Xanthoproteic Test:

* Αρχή: Αυτή η δοκιμή ανιχνεύει την παρουσία αρωματικών αμινοξέων όπως η τυροσίνη και η τρυπτοφάνη.

* Διαδικασία:

* Προσθέστε συμπυκνωμένο νιτρικό οξύ στο δείγμα.

* Θερμάνετε απαλά το μείγμα.

* Ένα κίτρινο χρώμα υποδεικνύει ένα θετικό αποτέλεσμα, υποδεικνύοντας την παρουσία αρωματικών αμινοξέων.

* Η προσθήκη αμμωνίας ενισχύει περαιτέρω το χρώμα σε πορτοκαλί-κίτρινο.

* Πλεονεκτήματα: Σχετικά ειδικά για πρωτεΐνες που περιέχουν αρωματικά αμινοξέα.

* Μειονεκτήματα: Όχι τόσο ευαίσθητα όσο άλλες δοκιμές.

4. Δοκιμή του Millon:

* Αρχή: Αυτή η δοκιμή ανιχνεύει την παρουσία τυροσίνης, αρωματικού αμινοξέος.

* Διαδικασία:

* Προσθέστε το αντιδραστήριο του Millon (διάλυμα νιτρικού υδραργύρου σε νιτρικό οξύ) στο δείγμα.

* Θερμάνετε απαλά το μείγμα.

* Ένα λευκό ίζημα που ενεργοποιεί το κόκκινο στην θέρμανση υποδεικνύει ένα θετικό αποτέλεσμα, επιβεβαιώνοντας την παρουσία τυροσίνης.

* Πλεονεκτήματα: Σχετικά ειδικά για την τυροσίνη, ένα κοινό αμινοξύ στις πρωτεΐνες.

* Μειονεκτήματα: Όχι τόσο ευαίσθητα όσο άλλες δοκιμές.

5. Δοκιμασία Bradford:

* Αρχή: Πρόκειται για μια χρωματομετρική δοκιμασία που μετρά τη συγκέντρωση πρωτεΐνης σε ένα δείγμα χρησιμοποιώντας μια βαφή που συνδέεται με πρωτεΐνες.

* Διαδικασία:

* Ανακατέψτε το δείγμα με λαμπρή μπλε βαφή Coomassie.

* Η βαφή δεσμεύεται με την πρωτεΐνη, με αποτέλεσμα μια αλλαγή χρώματος που μπορεί να μετρηθεί χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο.

* Πλεονεκτήματα: Εξαιρετικά ευαίσθητο και ακριβές, ευρέως χρησιμοποιούμενο για την ποσοτικοποίηση των πρωτεϊνών.

* Μειονεκτήματα: Απαιτεί φασματοφωτόμετρο και μπορεί να επηρεαστεί από ορισμένα απορρυπαντικά.

Επιλέγοντας τη σωστή δοκιμή:

Η καλύτερη δοκιμή για μια συγκεκριμένη κατάσταση θα εξαρτηθεί από παράγοντες όπως:

* Ευαισθησία: Πόση πρωτεΐνη αναμένεται στο δείγμα;

* Ειδικότητα: Χρειάζεται να ανιχνεύσετε έναν συγκεκριμένο τύπο πρωτεΐνης ή απλώς οποιαδήποτε πρωτεΐνη;

* Πόροι: Έχετε πρόσβαση στα απαραίτητα αντιδραστήρια και εξοπλισμό;

Είναι συχνά μια καλή ιδέα να χρησιμοποιήσετε πολλαπλές δοκιμές για να επιβεβαιώσετε την παρουσία πρωτεϊνών και να έχετε μια πληρέστερη κατανόηση της σύνθεσής τους.