Μέσα στο Din, Cells Fight Noise With Noise

Για όσους ψιθυρίζουν κινητά, οικογένειες που ζουν κοντά σε αυτοκινητόδρομους, αεροδρόμια ή τρένα, άτομα που αγαπούν τη μουσική, ακόμη και μεμονωμένα κελιά, ο θόρυβος είναι αναπόφευκτο γεγονός της ζωής. Στην καθημερινή ανθρώπινη εμπειρία, η ενόχληση είναι συχνά διαχειρίσιμη. Τα ηχομονωτικά φράγματα και τα ακουστικά ακύρωσης θορύβου βοηθούν στην απομάκρυνση της κακοφωνίας από τους γλυκούς ήχους της μουσικής ή της σιωπής. Αλλά για τα κύτταρα που αποτελούν όλα τα ζωντανά όντα, ο θόρυβος —που σημαίνει τυχαία μεταβλητότητα στο εξωτερικό περιβάλλον, συμπεριλαμβανομένων κυμαινόμενων πηγών τροφής, παθογόνων και θανατηφόρων τοξινών ή τυχαίων διεργασιών μέσα στα ίδια τα κύτταρα — μπορεί να είναι θέμα ζωής και θανάτου. P>

Τα τελευταία χρόνια, οι επιστήμονες ανακάλυψαν ότι το εσωτερικό του κυττάρου είναι ένα εκπληκτικά θορυβώδες μέρος, ανατρέποντας μια μακροχρόνια υπόθεση ότι η εσωτερική λειτουργία του είναι κανονική και προβλέψιμη. Τα μόρια μέσα στο κύτταρο κινούνται και αλληλεπιδρούν τυχαία, πράγμα που σημαίνει ότι οποιεσδήποτε επακόλουθες βιοχημικές αντιδράσεις, όπως η παραγωγή RNA και πρωτεΐνης - που απαιτούνται για σχεδόν όλη την κυτταρική δραστηριότητα - έχουν επίσης κάποιο στοιχείο τυχαίας. Πώς μπορεί ένα κύτταρο να εκτελέσει τις εργασίες του - τρώγοντας, διαιρώντας, διαφοροποιώντας - εάν ο μηχανισμός που οδηγεί αυτούς τους μηχανισμούς είναι μια μοριακή αναταραχή; Η ανάπτυξη ενός εμβρύου, για παράδειγμα, μοιάζει με μια καλά προγραμματισμένη διαδικασία, ενορχηστρωμένη από προβλέψιμα κύματα γονιδιακής δραστηριότητας για την παραγωγή ενός συγκεκριμένου σχεδίου ιστών. Πώς θα μπορούσε να αναδυθεί μέσα σε αυτόν τον διάχυτο θόρυβο;

«Δεν είχα ιδέα πόσο απίστευτα διαδεδομένος και διάχυτος είναι ο θόρυβος μέσα στο κύτταρο», είπε ο Michael Elowitz, ένας φυσικός που έγινε βιολόγος στο Ινστιτούτο Τεχνολογίας της Καλιφόρνια. "Τώρα βλέπω τον θόρυβο ως φακό μέσω του οποίου βλέπω όλα τα είδη κυτταρικών συμπεριφορών."

Οι περισσότερες πρώτες προσπάθειες για τη μελέτη του θορύβου επικεντρώθηκαν στον τρόπο με τον οποίο τα κύτταρα αντιμετωπίζουν αυτή την εγγενή τυχαιότητα, η οποία έχει παρενέργειες που κυμαίνονται από ενοχλητικές έως θανατηφόρες. Αλλά καθώς το πεδίο εξελισσόταν, περισσότεροι επιστήμονες άρχισαν να διερευνούν πώς τα κύτταρα μπορούν πραγματικά να χρησιμοποιήσουν τον εσωτερικό τους θόρυβο για να αντιμετωπίσουν τον εξωτερικό θόρυβο ενός απρόβλεπτου περιβάλλοντος. Αυτές οι τυχαίες εκρήξεις μοριακής δραστηριότητας μπορούν να οδηγήσουν σε κάθε είδους κυτταρικές αποφάσεις, ακόμη και την ταυτότητα που επιλέγει να λάβει το κύτταρο. Τώρα οι επιστήμονες αναρωτιούνται όλο και περισσότερο εάν ο θόρυβος είναι κυρίως ένας επικίνδυνος εχθρός από τον οποίο τα κύτταρα πρέπει να προστατεύονται ή αν μερικές φορές είναι σύμμαχος, με δυνητικά ευεργετικά χαρακτηριστικά στα οποία μπορεί να δράσει η εξέλιξη. Ίσως και οι δύο περιπτώσεις να είναι αληθινές. "Ο θόρυβος μπορεί να είναι εμπόδιο για ορισμένους τύπους κυτταρικών συμπεριφορών, καθώς και χρήσιμο χαρακτηριστικό για άλλους", είπε ο Elowitz.

Στα μικρόβια, για παράδειγμα, οι προσεγγίσεις που βασίζονται στον θόρυβο μπορεί να τους βοηθήσουν να αντισταθμίσουν τα στοιχήματά τους. Ακριβώς όπως οι επενδυτές διαφοροποιούν το χαρτοφυλάκιό τους για να προστατευτούν από μια απρόβλεπτη αγορά, ένας πληθυσμός βακτηρίων χρησιμοποιεί το θόρυβο για να διαφοροποιήσει τις μεθόδους τους για να αντιμετωπίσει έναν ασταθή κόσμο.

Ένας αριθμός μελετών έχει δείξει ότι οι τυχαίες διακυμάνσεις στα μικροβιακά γονίδια πυροδοτούν ορισμένα μικρόβια να κυνηγούν σε μια αδρανοποιημένη, ανθεκτική στα φάρμακα κατάσταση. Αυτό το φαινόμενο, γνωστό ως βακτηριακή επιμονή, είναι ένας λόγος που ορισμένες λοιμώξεις μπορεί να είναι δύσκολο να εξαλειφθούν. Μέσα σε έναν ποικίλο βακτηριακό πληθυσμό, τα ταχέως αναπτυσσόμενα μικρόβια είναι συνήθως καλύτερα. Αλλά όταν χτυπηθεί με ένα αντιβιοτικό, τα αδρανοποιημένα μικρόβια είναι αυτά που επιβιώνουν. "Είναι όπως όταν ο πρόεδρος δίνει μια διεύθυνση για την κατάσταση της Ένωσης και στέλνουν ένα μέλος του υπουργικού συμβουλίου σε μια άγνωστη τοποθεσία", δήλωσε ο Τζέιμς Κόλινς, βιομηχανικός στο Πανεπιστήμιο της Βοστώνης.

Καθώς έρχονται στο φως νέα παραδείγματα ευεργετικού θορύβου, οι επιστήμονες εργάζονται για να κατανοήσουν καλύτερα τις επιπτώσεις στη συμπεριφορά των κυττάρων, την εξέλιξη και την ανθρώπινη υγεία. «Ποιες είναι οι λειτουργικές συνέπειες του θορύβου;» είπε ο Leor Weinberger, βιοφυσικός στο Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στο Σαν Φρανσίσκο.

Ο εντοπισμός των επιπτώσεων του θορύβου θα είναι σημαντικός για την ανάπτυξη θεραπειών για λοιμώξεις και ίσως ακόμη και καρκίνο. «Η επιμονή στα αντιβιοτικά είναι ένα εξαιρετικό παράδειγμα, όπου ο θόρυβος έχει άμεσο αντίκτυπο στις μολυσματικές ασθένειες», είπε ο Elowitz. (Η επιμονή διαφέρει από την αντίσταση στα αντιβιοτικά, η οποία εμφανίζεται όταν οι μεταλλάξεις στο μικροβιακό DNA, και όχι σε κατάσταση αδράνειας, τους επιτρέπουν να ανέχονται φάρμακα.)

Η κατανόηση του τρόπου λειτουργίας του θορύβου στο κύτταρο θα μπορούσε επίσης να βοηθήσει τους επιστήμονες να εξηγήσουν ένα αινιγματικό περιστατικό στη γενετική όπου ορισμένες δυνητικά ισχυρές μεταλλάξεις δεν επηρεάζουν όλα τα άτομα που τις φέρουν. Η έρευνα δείχνει ότι οι τυχαίες διακυμάνσεις στη δραστηριότητα των γονιδίων θα μπορούσαν να εξηγήσουν ορισμένες περιπτώσεις του φαινομένου, γνωστού ως μερική διείσδυση, το οποίο πιθανότατα παίζει ρόλο σε ορισμένες ανθρώπινες ασθένειες.

Ο θόρυβος ήταν παραδοσιακά δύσκολο να μελετηθεί στη βιολογία, επειδή οι περισσότερες βιολογικές τεχνικές, όπως η μέτρηση της γονιδιακής δραστηριότητας, υπολογίζουν τον μέσο όρο της παραγωγής πολλών κυττάρων, διαγράφοντας την ατομική μεταβλητότητα. Αλλά η ανάπτυξη νέας τεχνολογίας απεικόνισης υψηλής ανάλυσης ικανής να συλλαμβάνει μεμονωμένα κύτταρα επέτρεψε επιτέλους στους επιστήμονες να καταγράφουν αξιόπιστα το θόρυβο σε αυτό το επίπεδο και να μελετήσουν πώς επηρεάζει τη συμπεριφορά. «Βρισκόμαστε στη μέση μιας επανάστασης στη βιολογία, της μετάβασης από την ανάλυση των μέσων όρων κυττάρων στην εξέταση των ιδιοτήτων των μεμονωμένων κυττάρων», είπε ο Elowitz. "Αυτό αλλάζει την άποψή μας για πολλά πράγματα."

Ένα σημείο καμπής ήρθε το 2002, όταν ο Elowitz και οι συνεργάτες του χαρτογράφησαν την τυχαία γονιδιακή δραστηριότητα σε μεμονωμένα κύτταρα για πρώτη φορά. Η ομάδα του Έλοβιτς προσπαθούσε να δημιουργήσει λαμπερά βακτήρια που θα αναβοσβήνουν και θα σβήνουν σαν χριστουγεννιάτικο φως. Η προσπάθεια λειτούργησε, αλλά το φλας ήταν ασταθές και όχι κανονικό - ακόμη και τα πανομοιότυπα κύτταρα γρήγορα έγιναν απελπιστικά εκτός συγχρονισμού, είπε. Συνειδητοποιώντας ότι οι βιολόγοι δεν είχαν ιδέα πόσο θορυβώδη είναι τα κύτταρα, ο Elowitz ξεκίνησε να μάθει περισσότερα.

Οι ερευνητές ξεκίνησαν με δύο αντίγραφα ενός γονιδίου, τα οποία ήταν πανομοιότυπα εκτός από το φθορίζον χρώμα που παρήγαγαν, κόκκινο ή πράσινο. Εάν η γονιδιακή δραστηριότητα ελέγχεται με κανονικό, ντετερμινιστικό τρόπο, τότε τα γονίδια θα πρέπει να παράγουν ίσες ποσότητες κόκκινου και πράσινου φωτός, το οποίο θα συνδυαστεί για να κάνει ένα κύτταρο να λάμπει κίτρινο. Ωστόσο, εάν πρόκειται για μια θορυβώδη, τυχαία διαδικασία, η δραστηριότητα των δύο γονιδίων θα διαφέρει, με ορισμένα κύτταρα να παράγουν πολύ πράσινο και άλλα πολύ κόκκινο ή οποιονδήποτε αριθμό άλλων παραλλαγών. Το αποτέλεσμα που προκύπτει, που δημοσιεύτηκε το 2002 στο εξώφυλλο του Science, είναι ένας εορταστικός συνδυασμός και των τριών χρωμάτων. «Έτσι μοιάζει ο θόρυβος», είπε ο Έλοβιτς. "Μπορείτε να δείτε ότι το κελί είναι μια μη ντετερμινιστική μηχανή."

Για να καταλάβουν εάν ο θόρυβος μπορεί να επηρεάσει σημαντικές κυτταρικές αποφάσεις, ο Elowitz και οι συνεργάτες του στράφηκαν στα βακτήρια, τα οποία έχουν μια περιστασιακή συνήθεια να συλλέγουν ξένο DNA στο περιβάλλον και να το ενσωματώνουν στο γονιδίωμά τους. Είναι μια δραστηριότητα υψηλού κινδύνου με δυνητικά υψηλή απόδοση. Το ξένο DNA μπορεί να περιέχει ιικά γονίδια που μπορούν να σκοτώσουν το κύτταρο ή μπορεί να φιλοξενεί γενετικές μονάδες που καθιστούν το κύτταρο ανθεκτικό στα δηλητήρια. Οι ερευνητές θεωρούν ότι όταν χτυπηθούν από μια περιβαλλοντική καταστροφή, όπως τα αντιβιοτικά, αυτά τα κύτταρα με επιπλέον κομμάτια DNA είναι πιο πιθανό να έχουν τα εργαλεία για να επιβιώσουν. Για άλλη μια φορά, τα βακτήρια φαίνεται να αντισταθμίζουν τα στοιχήματά τους.

Μόνο ένας μικρός υποπληθυσμός κυττάρων είναι ικανός να συλλαμβάνει DNA, μια κατάσταση γνωστή ως «ικανότητα», σε οποιαδήποτε δεδομένη στιγμή, ακόμη και όταν τα κύτταρα είναι γενετικά πανομοιότυπα και αναπτύσσονται υπό τις ίδιες συνθήκες. Ο Elowitz και ο Gurol Suel, τότε μεταδιδακτορικός ερευνητής στο εργαστήριο του Elowitz, ανακάλυψαν ότι η απόφαση να γίνεις ικανός διέπεται από τυχαία γονιδιακή δραστηριότητα, η οποία με τη σειρά της ενεργοποιεί έναν βρόχο θετικής ανάδρασης. Ο Έλοβιτς το παρομοιάζει με το κούνημα της λαβής σε μια τουαλέτα. Ένα ελαφρύ κούνημα της λαβής θα προκαλέσει μερικές φορές ένα ξέπλυμα κατά τύχη. «Στο κύτταρο, ο θόρυβος «κουνάει συνεχώς τη λαβή» που ελέγχει τις αποφάσεις για τη μοίρα του κυττάρου, και αυτό αναγκάζει ορισμένα κύτταρα - τυχαία - να αλλάζουν τη μοίρα τους», είπε. Η μελέτη, που δημοσιεύτηκε στο Nature, ήταν μία από τις πρώτες που έδειξε ότι ο θόρυβος θα μπορούσε να εξυπηρετήσει μια βιολογική λειτουργία.

Το 2009, ο Σουέλ, επικεφαλής του εργαστηρίου του στο Πανεπιστήμιο του Τέξας, και ο Έλοβιτς έσπρωξαν ξανά μπροστά, δείχνοντας ότι αυτός ο θόρυβος θα μπορούσε να επηρεάσει την επιβίωση των κυττάρων. Κατασκεύασαν μια λιγότερο θορυβώδη εκδοχή του γενετικού κυκλώματος που ενεργοποιεί την αρμόδια κατάσταση και συνέκριναν και τα δύο στελέχη. Κάτω από ένα ευρύ φάσμα συνθηκών, τα βακτήρια με το πιο θορυβώδες κύκλωμα είναι πιο πιθανό να επιβιώσουν.

«Εκείνη την εποχή, φαινόταν να υπάρχει μια διαδεδομένη άποψη για τον θόρυβο ως ένα είδος ενόχλησης, ως έλλειψη ζωής, τουλάχιστον σε σύγκριση με τα συστήματα που κατασκευάζονται από τον άνθρωπο», είπε ο Έλοβιτς. «Ερχόμουν από τη φυσική, όπου οι άνθρωποι επινοούν έξυπνους τρόπους για να μειώσουν το θόρυβο και ακόμη πιο έξυπνους τρόπους για να χρησιμοποιήσουν το θόρυβο για να κάνουν μετρήσεις. Και έτσι νομίζω ότι το υπόβαθρο της φυσικής με οδήγησε να αναρωτηθώ εάν τα κύτταρα, όπως οι φυσικοί, θα μπορούσαν επίσης να έχουν βρει τρόπους να χρησιμοποιούν και τον θόρυβο."

Ο Σουέλ, τώρα στο Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στο Σαν Ντιέγκο, και οι συνεργάτες του προσπαθούν τώρα να καταλάβουν πώς ο θόρυβος επηρεάζει μια κοινότητα στο σύνολό της. «Γνωρίζουν τα κύτταρα ο ένας τον θόρυβο του άλλου; Εάν ο γείτονας ενός κελιού είναι πολύ θορυβώδης, πρέπει και αυτό το κελί να γίνει θορυβώδες;» ρώτησε. "Η σχέση κυττάρου με κύτταρο και η επιρροή μεταξύ των κυττάρων είναι πολύ ελάχιστα κατανοητή."

Οι συνέπειες του θορύβου δεν περιορίζονται στα μικρόβια - ο θόρυβος μπορεί επίσης να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη πιο πολύπλοκων οργανισμών, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπων. Τα έμβρυα χρησιμοποιούν έναν αριθμό μηχανισμών για να προχωρήσουν από μια μάζα αδιαφοροποίητων κυττάρων σε διαφοροποιημένους ιστούς. Ορισμένα στοιχεία υποδηλώνουν ότι η τυχαία έκφραση διαφορετικών γονιδίων μπορεί να παίζει κάποιο ρόλο. Η ομάδα του Elowitz εξετάζει τώρα τον ρόλο που παίζει η έκφραση στοχαστικών γονιδίων στα βλαστοκύτταρα, τα αδιαφοροποίητα κύτταρα που δημιουργούν διαφορετικούς ιστούς στο σώμα μας. Αυτά τα κύτταρα αλλάζουν αυθόρμητα καταστάσεις, αλλά οι επιστήμονες δεν γνωρίζουν ακόμη τι προκαλεί αυτή την απόφαση. Οι ερευνητές πιστεύουν ότι ο θόρυβος θα μπορούσε να παίξει κάποιο ρόλο, επομένως συνδυάζουν ανάλυση ενός μορίου με ταινίες time-lapse μεμονωμένων κυττάρων για την παρακολούθηση της τυχαίας δραστηριότητας σε πολλά διαφορετικά γονίδια, καθώς τα κύτταρα αλλάζουν καταστάσεις.

Η πιθανότητα παίζει επίσης σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη τόσο της μύτης όσο και των ματιών μας. Τα ευαίσθητα στο φως κύτταρα στα μάτια μας επιλέγουν τυχαία εάν θα ανιχνεύσουν κόκκινο ή πράσινο φως. Αν και οι επιστήμονες δεν έχουν καταλάβει πώς, τα κύτταρα στη μύτη μας επιλέγουν τυχαία να παράγουν μόνο έναν από τους χίλιους περίπου διαφορετικούς υποδοχείς ανίχνευσης οσμής. Το αποτέλεσμα είναι μια σειρά από κύτταρα ικανά να ανιχνεύουν χιλιάδες μυρωδιές. "Το κύτταρο εκμεταλλεύεται τον θόρυβο για να δημιουργήσει ποικιλομορφία χωρίς να βασίζεται σε ένα πολύπλοκο σύστημα", δήλωσε ο Claude Desplan, βιολόγος στο Πανεπιστήμιο της Νέας Υόρκης.

Ωστόσο, ο Desplan δεν πιστεύει ότι ο θόρυβος γενικά οδηγεί την ανάπτυξη. «Νομίζω ότι η στοχαστική επιλογή χρειάζεται μόνο όταν χρειάζεται να αυξήσεις την ποικιλομορφία πέρα ​​από αυτό που μπορείς να κάνεις με ντετερμινιστικό τρόπο», είπε. Για παράδειγμα, η ομάδα του Desplan έχει μελετήσει δύο διαφορετικά είδη μύγας. Στη μία, η κατανομή των φωτοευαίσθητων μορίων στο μάτι είναι τυχαία, ενώ στην άλλη είναι ντετερμινιστική (τα φωτοευαίσθητα μόρια είναι διατεταγμένα σε κανονικές σειρές), υποδηλώνοντας ότι η φύση μπορεί να χρησιμοποιήσει και τις δύο προσεγγίσεις.

Οι αντιφατικές μύγες του Desplan απεικονίζουν μια από τις σημαντικότερες συζητήσεις στον τομέα. Πόσο σημαντικός είναι ο θόρυβος; Σε αντίθεση με τη χρήση του θορύβου, η φύση έχει εξελίξει ισχυρούς τρόπους ελέγχου του, όπως στιβαρά κυκλώματα που εξακολουθούν να λειτουργούν αξιόπιστα παρουσία θορύβου. Ο θόρυβος μπορεί να είναι και ευεργετικός και επιζήμιος, αλλά ποια ποιότητα κυριαρχεί; Ο Ντεσπλάν ευνοεί το δεύτερο. «Στις περισσότερες περιπτώσεις, ο θόρυβος είναι κακό πράγμα», είπε. "Αλλά μερικές φορές μπορούμε να πάρουμε ένα κακό και να το κάνουμε καλό."

Σύμφωνα με τον Ido Golding, έναν φυσικό στο Baylor College of Medicine, η ιδέα ότι η τυχαιότητα μπορεί να είναι σημαντική για την ανάπτυξη και την εξέλιξη των μικροβίων έχει υπερπουληθεί. «Πιστεύω ότι υπήρξαν ορισμένα παραδείγματα, αλλά υπάρχει κίνδυνος υπερερμηνείας τους», είπε. «Θα υποθέσω ότι το 99 τοις εκατό του χρόνου, το κύτταρο καταπολεμά τις ανεπιθύμητες διακυμάνσεις ή βρίσκει τρόπους να ζήσει με αυτές τις διακυμάνσεις». Ο Golding πιστεύει ότι ορισμένα από τα αποτελέσματα που άλλοι επιστήμονες αποδίδουν στον θόρυβο οφείλονται στην πραγματικότητα σε ντετερμινιστικούς παράγοντες που δεν είναι ακόμη σε θέση να μετρήσουν. Αν και είναι σαφές ότι υπάρχει κάποιο επίπεδο βιοχημικού θορύβου, "το να κατηγορείς τον θόρυβο κάθε φορά που βλέπεις διαφορές μεταξύ των κυττάρων είναι πολύ επικίνδυνο πράγμα", είπε.

Σε μια ανασκόπηση που δημοσιεύτηκε στο Science τον Δεκέμβριο, ο Golding και ο Alvaro Sanchez, ένας βιολόγος στο Πανεπιστήμιο του Χάρβαρντ που μελετά πώς η μαγιά μπορεί να χρησιμοποιήσει τον θόρυβο, άφησαν στην άκρη τις διαφορές τους για να εξερευνήσουν μια ερώτηση στην καρδιά της. Είναι η θορυβώδης γονιδιακή έκφραση ένα χαρακτηριστικό για το οποίο μπορεί να επιλεγεί, όπως το ύψος ή το χρώμα των ματιών, ή μια εγγενής ιδιότητα του γονιδίου; "Θα μπορούσαμε είτε να είμαστε γκρινιάρηδες και να απορρίπτουμε ο ένας τα χαρτιά του άλλου όλη την ώρα ή να γράφουμε μια κριτική για να εξαλείψουμε τις διαφορές", είπε ο Golding.

Εάν ο θόρυβος είναι ένα χαρακτηριστικό που κωδικοποιείται στην αλληλουχία του γονιδίου, η εξέλιξη μπορεί να είναι σε θέση να τον ρυθμίσει με ακρίβεια, όπως η εξελικτική διαδικασία μπορεί να κάνει έναν αρπακτικό γρηγορότερο ή ένα ψάρι καλύτερο κολυμβητή. Πειράματα σε μαγιά δείχνουν ότι αυτό συμβαίνει. «Μπορείτε να έχετε γονίδια με πολύ θόρυβο ή λίγο θόρυβο», είπε ο Sanchez. Οι επιστήμονες μπορούν να τσιμπήσουν με κομμάτια DNA που ελέγχουν τη δραστηριότητα των γονιδίων και αλλάζουν όχι μόνο το πόσο RNA παράγεται, αλλά και το πόσο θορυβώδες παράγεται. Αυτή η ερώτηση δεν έχει μελετηθεί τόσο εκτενώς στα βακτήρια. Ωστόσο, ορισμένα αποτελέσματα δείχνουν προς την άλλη κατεύθυνση. Η ομάδα του Golding έδειξε ότι στο E. coli, ο θόρυβος συνδέεται με το επίπεδο δραστηριότητας ενός γονιδίου, υποδηλώνοντας ότι είναι μια εγγενής ιδιότητα του γονιδιώματος ή του σχετικού κυτταρικού μηχανισμού.

Καθώς οι δύο επιστήμονες εργάζονταν μαζί για να αναθεωρήσουν τη βιβλιογραφία, άρχισαν να βλέπουν ο ένας την άποψη του άλλου. «Το συμπέρασμα της εργασίας μας είναι ότι εξακολουθεί να είναι ένα ανοιχτό ερώτημα, αλλά ήμουν πολύ πιο πεισματάρης», είπε ο Γκόλντινγκ. "Τώρα εκτιμώ πλήρως ότι υπάρχουν αντικρουόμενα στοιχεία, πράγμα που σημαίνει ότι ορισμένοι από εμάς κάνουμε λάθος."