Γιατί η ακετοκαρμίνη χρησιμοποιείται σε μελέτες μιτωτικών χρωμοσωμάτων

Για τη χρώση διαφορετικών βιολογικών υλικών χρησιμοποιούνται διαφορετικοί λεκέδες. Οι λεκέδες αντιδρούν με μια συγκεκριμένη ουσία σε ένα βιολογικό δείγμα, δίνοντας ένα συγκεκριμένο χρώμα σε αυτήν την ουσία. Η ακετοκαρμίνη είναι μια κηλίδα που χρησιμοποιείται για την επίδειξη των νουκλεϊκών οξέων μέσα στο χρωμόσωμα. Υπάρχουν επίσης κάποιοι άλλοι λόγοι που κάνουν την ακετοκαρμίνη πιο κατάλληλη ως λεκέ νουκλεϊκού οξέος. Αναλύονται σε αυτό το άρθρο.

Βασικές περιοχές που καλύπτονται

1. Τι είναι ο Λεκές
– Ορισμός, τύποι λεκέδων
2. Τι είναι το Acetocarmine
– Ορισμός, Χαρακτηριστικά, Προετοιμασία
3. Γιατί η ακετοκαρμίνη χρησιμοποιείται σε μελέτες μιτωτικών χρωμοσωμάτων
– Παρασκευή, χρήση ακετοκαρμίνης

Βασικοί όροι:ακετοκαρμίνη, χρωμοσώματα, φορμαλδεΰδη, υδρόλυση, μελέτες μιτωτικών χρωμοσωμάτων, λεκέδες

Τι είναι η χρώση

Η χρώση είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται σε μικροσκοπικές μελέτες βιολογικών δειγμάτων για την ενίσχυση της αντίθεσης του βιολογικού δείγματος κάτω από το μικροσκόπιο. Αναδεικνύει τις δομές του βιολογικού ιστού όπως συγκεκριμένους κυτταρικούς πληθυσμούς, οργανίδια, DNA, πρωτεΐνες, υδατάνθρακες και λιπίδια. Ο λεκές μπορεί να είναι είτε συνθετικές χημικές ουσίες είτε φυσικές χημικές ουσίες που προέρχονται από φυτά ή ζώα. Οι μέθοδοι χρώσης περιγράφονται παρακάτω.

Μονή χρώση – Στην απλή χρώση, χρησιμοποιείται μόνο μία χρώση για να δώσει ένα μόνο χρώμα σε ολόκληρο το βιολογικό δείγμα.
Διπλή χρώση – Στη διπλή χρώση, δύο λεκέδες χρησιμοποιούνται για τη χρώση συγκεκριμένων οργανιδίων ή συγκεκριμένης περιοχής.
Πολλαπλή χρώση – Στην πολλαπλή χρώση, χρησιμοποιούνται περισσότερες από δύο κηλίδες για τη συγκεκριμένη χρώση συστατικών όπως τα οργανίδια στο δείγμα.

Τι είναι η ακετοκαρμίνη

Η καρμίνη είναι μια βασική βαφή που παρασκευάζεται από ένα έντομο γνωστό ως Coccus cacti . Η ακετοκαρμίνη παράγεται με ανάμιξη καρμίνης με παγόμορφο οξικό οξύ. Είναι μια ειδική χρώση για το DNA που χρησιμοποιείται για την απεικόνιση υπερ-τυλιγμένων χρωμοσωμάτων κατά τα διάφορα στάδια της μίτωσης.

Προετοιμασία χρώσης με ακετοκαρμίνη

Διαλύστε 10 g καρμίνης σε 1 λίτρο παγόμορφου οξικού οξέος 45%.
Προσθέστε κόκκους αλουμινίου και αναρροή για 24 ώρες.
Φιλτράρετε σε σκούρα μπουκάλια και αποθηκεύστε στους 4°C.
Η χρώση μπορεί να ενταθεί με την προσθήκη χλωριούχου σιδήρου (προσθέστε 5 mL διαλύματος χλωριούχου σιδήρου 10 % ανά 100 mL % ακετοκαρμίνης).

Γιατί η χρώση ακετοκαρμίνης χρησιμοποιείται σε μελέτες μιτωτικών χρωμοσωμάτων

Γενικά, η ακετοκαρμίνη είναι μια βαφή που χρησιμοποιείται σε απλή χρώση. Χρωματίζει τόσο τον πυρήνα όσο και το κυτταρόπλασμα. Προκειμένου να χρωματιστούν τα χρωμοσώματα ενώ διατηρείται το κυτταρόπλασμα άχρωμο, το βιολογικό δείγμα θα πρέπει πρώτα να υποβληθεί σε επεξεργασία με φορμαλδεΰδη και, στη συνέχεια, να μπορεί να υδρολυθεί με HCl στους 60 °C με τον σωστό χρόνο υδρόλυσης. Τέλος, μπορεί να αντιμετωπιστεί με ακετοκαρμίνη. Η ακετοκαρμίνη παράγει μεγάλα συσσωματώματα βαφής σε ασθενώς όξινες συνθήκες (pH 4-5). Η επίδειξη της μίτωσης της ρίζας του κρεμμυδιού με χρώση με ακετοκαρμίνη φαίνεται στην εικόνα 1 .

Εικόνα 1:Μίτωση ρίζας κρεμμυδιού

Ωστόσο, η ακετοκαρμίνη είναι ελαφρώς τοξική από τις άλλες κηλίδες νουκλεϊκού οξέος όπως η ακετο-ορκεΐνη. Είναι επίσης φθηνότερο από άλλους τύπους λεκέδων.

Συμπέρασμα

Οι λεκέδες χρησιμοποιούνται σε μικροσκοπικές μελέτες για την ενίσχυση της αντίθεσης συγκεκριμένων βιολογικών συστατικών σε ένα δείγμα. Η ακετοκαρμίνη είναι μια τέτοια χρώση που χρησιμοποιείται για τη χρώση νουκλεϊκού οξέος μέσα στα κύτταρα. Καθώς η ακετοκαρμίνη χρωματίζει ειδικά τα χρωμοσώματα εκτός από το κυτταρόπλασμα, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την οπτικοποίηση των χρωμοσωμάτων σε μιτωτικές μελέτες.

Αναφορά:

1. "ΧΡΩΣΗ ΑΚΕΤΟΚΑΡΜΙΝΗΣ." Kansas State University, Διαθέσιμο εδώ.
2.J. A. Rattenbury (2009) Specific Staining of Nucleolar Substance with Aceto-Carmine, Stain Technology, Διατίθεται εδώ.

Εικόνα Ευγενική προσφορά:

1. "Μίτωση ρίζας κρεμμυδιού" Από στατική – Ίδια εργασία (CC BY-SA 3.0) μέσω Commons Wikimedia