Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της ανοσοκατακρήμνισης και του Western Blot

Η κύρια διαφορά μεταξύ της ανοσοκατακρήμνισης και του western blot είναι ότι η ανοσοκατακρήμνιση απομονώνει μια πρωτεΐνη στόχο από ένα διάλυμα χρησιμοποιώντας αντισώματα και σφαιρίδια αγαρόζης, ενώ το western blot χρησιμοποιεί ηλεκτροφόρηση γέλης και ανιχνευτές αντισωμάτων για την ανάλυση πρωτεϊνών.

Η ανοσοκατακρήμνιση και το western blot είναι δύο τεχνικές ανάλυσης πρωτεϊνών. Ενώ η ανοσοκατακρήμνιση χρησιμοποιεί ραδιοσήμανση, το western blot χρησιμοποιεί αντισώματα για την οπτικοποίηση των διαχωρισμένων πρωτεϊνών.

Βασικοί όροι

Ανοσοκαθίζηση, Ανάλυση πρωτεϊνών, Western Blot

Τι είναι η ανοσοκατακρήμνιση

Η ανοσοκατακρήμνιση είναι η τεχνική της κατακρήμνισης πρωτεϊνών από το διάλυμα χρησιμοποιώντας ειδική για το αντίσωμα δέσμευση στην πρωτεΐνη στόχο. Μεταξύ χιλιάδων πρωτεϊνών, είναι σημαντικό να απομονωθούν και να συγκεντρωθούν οι πρωτεΐνες από ένα διάλυμα. Επιπλέον, τα αντισώματά του συνδέονται με ένα στερεό υπόστρωμα. Ωστόσο, η τεχνική είναι σημαντική για την ανοσοκατακρήμνιση μεμονωμένων πρωτεϊνών, την ανοσοκατακρήμνιση συμπλόκου πρωτεϊνών, την ανοσοκατακρήμνιση χρωματίνης, την ανοσοκατακρήμνιση ριβονουκλεοπρωτεϊνών και τις πρωτεΐνες ετικέτας.

Εικόνα 1:Ανοσοκαθίζηση χρωματίνης

Επιπλέον, οι τρεις μέθοδοι ανοσοκατακρήμνισης περιλαμβάνουν την άμεση, την έμμεση και την επιλογή. Η μέθοδος άμεσης ανοσοκατακρήμνισης χρησιμοποιεί αντισώματα ειδικά για την πρωτεΐνη στόχο για να την ακινητοποιήσει σε μια στερεή επιφάνεια. Η μέθοδος έμμεσης ανοσοκατακρήμνισης χρησιμοποιεί αντισώματα ειδικά για μια ομάδα πρωτεϊνών για ακινητοποίηση. Επιπλέον, η μέθοδος επιλογής είναι σημαντική όταν η συγκέντρωση της πρωτεΐνης στόχου είναι χαμηλή σε ένα διάλυμα.

Τι είναι το Western Blot

Το Western blot ή immunoblot είναι μια τεχνική ανίχνευσης πρωτεϊνών σε ένα διάλυμα κατά μέγεθος και ειδικότητα. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί τρεις εργασίες για τον διαχωρισμό μιας πρωτεΐνης:διαχωρισμό κατά μέγεθος, μεταφορά πρωτεΐνης σε στερεό υπόστρωμα, καθώς και σήμανση της πρωτεΐνης στόχου χρησιμοποιώντας ένα πρωτογενές και δευτερεύον αντίσωμα για οπτικοποίηση.

Εικόνα 2:Western Blot

Πρώτον, το πρωτεύον αντίσωμα συνδέεται με την πρωτεΐνη-στόχο. Στη συνέχεια, το δευτερεύον αντίσωμα συνδέεται με το πρωτεύον αντίσωμα. Ακολουθεί η σύνδεση του δευτερογενούς αντισώματος. Τέλος, η ανίχνευση γίνεται είτε με χρώση, είτε με ανοσοφθορισμό, είτε με ραδιενέργεια. Ωστόσο, οι πρωτεΐνες στο διάλυμα κλασματοποιούνται κατά μέγεθος με ηλεκτροφόρηση γέλης πριν από την ανίχνευση και την ειδική δέσμευση αντισωμάτων.

Ομοιότητες μεταξύ της ανοσοκατακρήμνισης και της κηλίδας Western

• Η ανοσοκαταβύθιση και η κηλίδα Western είναι δύο τεχνικές απομόνωσης πρωτεϊνών από διαλύματα.
• Επιπλέον, και οι δύο χρησιμοποιούν ειδικά αντισώματα για τη στόχευση πρωτεϊνών στη διαδικασία.

Διαφορά μεταξύ ανοσοκαθίζησης και Western Blot

Ορισμός

Η ανοσοκατακρήμνιση αναφέρεται στην τεχνική καθίζησης ενός πρωτεϊνικού αντιγόνου εκτός διαλύματος χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα που συνδέεται ειδικά με τη συγκεκριμένη πρωτεΐνη, ενώ το western blot αναφέρεται σε μια ευρέως χρησιμοποιούμενη αναλυτική τεχνική στη μοριακή βιολογία και ανοσογενετική για την ανίχνευση συγκεκριμένων πρωτεϊνών σε δείγμα ομογενοποίησης ή εκχυλίσματος ιστού.

Σημασία

Συνήθως, η ανοσοκατακρήμνιση απομονώνει μια πρωτεΐνη-στόχο από ένα διάλυμα χρησιμοποιώντας αντισώματα και σφαιρίδια αγαρόζης, ενώ το western blot χρησιμοποιεί ηλεκτροφόρηση γέλης και ανιχνευτές αντισωμάτων για να αναλύσει το μέγεθος και την ποσότητα των πρωτεϊνών.

Διαμόρφωση πρωτεϊνών

Η ανοσοκατακρήμνιση λειτουργεί στη φυσική διαμόρφωση μιας πρωτεΐνης ενώ το western blot αναλύει το μετουσιωμένο στάδιο μιας πρωτεΐνης.

Συγκέντρωση

Επιπλέον, η ανοσοκατακρήμνιση απαιτεί υψηλότερη συγκέντρωση πρωτεϊνών ενώ το western blotting ισχύει για λιγότερες συγκεντρώσεις πρωτεϊνών στα διαλύματα.

Αναγνώριση

Ωστόσο, η ανοσοκατακρήμνιση χρησιμοποιεί ραδιοσήμανση ενώ το western blot χρησιμοποιεί αντισώματα συζευγμένα με ένζυμα.

Συμπέρασμα

Συνοπτικά, η ανοσοκατακρήμνιση και το western blot είναι δύο τεχνικές απομόνωσης πρωτεϊνών από ένα διάλυμα. Στην ανοσοκατακρήμνιση, η πρωτεΐνη στόχος κατακρημνίζεται έξω από το διάλυμα, ενώ στην κηλίδα western, οι πρωτεΐνες του διαλύματος κλασματώνονται κατά μέγεθος. Ωστόσο, η μέθοδος ανίχνευσης και των δύο είναι κυρίως η ίδια χρησιμοποιώντας αντισώματα. Ως εκ τούτου, η κύρια διαφορά μεταξύ της ανοσοκατακρήμνισης και του western blot είναι η λειτουργία τους.