Ποιες είναι οι δοκιμές για τις πρωτεΐνες;
* SDS-PAGE (Ηλεκτροφόρηση πηκτώματος με δωδεκυλοθειικό νάτριο) :Αυτή η δοκιμή διαχωρίζει τις πρωτεΐνες με βάση το μέγεθος και το φορτίο τους. Οι πρωτεΐνες αντιμετωπίζονται πρώτα με SDS, οι οποίες τους μειώνει και τους δίνουν αρνητική επιβάρυνση. Στη συνέχεια, είναι ηλεκτροφορές μέσω ενός πηκτώματος πολυακρυλαμιδίου, το οποίο λειτουργεί ως μοριακό κόσκινο. Μικρότερες πρωτεΐνες μεταναστεύουν ταχύτερα μέσω του πηκτώματος από τις μεγαλύτερες πρωτεΐνες.
* κηλίδωση Western :Αυτή η δοκιμή χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό συγκεκριμένων πρωτεϊνών σε ένα δείγμα. Οι πρωτεΐνες διαχωρίζονται πρώτα με SDS-PAGE και στη συνέχεια μεταφέρονται σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Η μεμβράνη στη συνέχεια επωάζεται με αντισώματα ειδικά για την πρωτεΐνη ενδιαφέροντος. Εάν τα αντισώματα συνδεθούν με την πρωτεΐνη, θα παραχθεί ένα χρωματομετρικό ή φθορίζον σήμα.
* ανοσοπροσδιορές :Αυτή η δοκιμή χρησιμοποιείται για τη μέτρηση της συγκέντρωσης μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης σε ένα δείγμα. Τα αντισώματα ειδικά για την πρωτεΐνη ενδιαφέροντος ακινητοποιούνται σε μια σταθερή υποστήριξη, όπως μια πλάκα μικροτιτλοδότησης. Στη συνέχεια, το δείγμα προστίθεται στην πλάκα και οποιαδήποτε πρωτεΐνη που υπάρχει στο δείγμα θα δεσμεύεται με τα αντισώματα. Η ποσότητα της δεσμευμένης πρωτεΐνης μπορεί να ποσοτικοποιηθεί με μέτρηση της απορρόφησης ή του φθορισμού της πλάκας.
* φασματομετρία μάζας :Αυτή η δοκιμή χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό και τον χαρακτηρισμό των πρωτεϊνών με βάση την αναλογία μάζας προς φόρτιση (m/z). Οι πρωτεΐνες αφομοιώνονται πρώτα σε μικρότερα πεπτίδια, τα οποία στη συνέχεια διαχωρίζονται με υγρή χρωματογραφία. Τα πεπτίδια στη συνέχεια ιονίζονται και αναλύονται με φασματόμετρο μάζας. Το m/z κάθε πεπτιδίου μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης από την οποία ήρθε.
Αυτά είναι μόνο μερικές από τις πολλές δοκιμές που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη μελέτη πρωτεϊνών. Η επιλογή της δοκιμής εξαρτάται από τις συγκεκριμένες ανάγκες του ερευνητή.
