Γιατί η συνολική πρωτεΐνη μετράται στα 595 nm σε δοκιμασία βιο-Rad;

Η δοκιμασία πρωτεΐνης Bio-Rad (επίσης γνωστή ως δοκιμασία Bradford) δεν μετρεί στην πραγματικότητα την ολική πρωτεΐνη στα 595 nm. Είναι μια χρωματομετρική δοκιμασία όπου η απορρόφηση μετράται στα 595 nm . Εδώ είναι γιατί:

* Coomassie Brilliant Blue G-250 Dye: Η δοκιμασία χρησιμοποιεί αυτή τη βαφή, η οποία δεσμεύεται με πρωτεΐνες. Αυτή η δέσμευση αλλάζει τη δομή της βαφής και προκαλεί μετατόπιση στο φάσμα απορρόφησης.

* Αλλαγή χρώματος: Όταν η βαφή συνδέεται με την πρωτεΐνη, αλλάζει το χρώμα από καφέ σε μπλε. Αυτή η μπλε μορφή έχει μέγιστη απορρόφηση στα 595 nm.

* Ποσοτικοποίηση πρωτεΐνης: Η ένταση του μπλε χρώματος είναι άμεσα ανάλογη με την ποσότητα της παρούσας πρωτεΐνης. Με τη μέτρηση της απορρόφησης στα 595 nm, μπορούμε να ποσοτικοποιήσουμε τη συγκέντρωση πρωτεΐνης.

Συνοπτικά:

* Η δοκιμασία Bio-Rad χρησιμοποιεί Coomassie λαμπρή μπλε χρωστική G-250 για να δεσμεύσει τις πρωτεΐνες.

* Η δεσμευμένη βαφή γίνεται μπλε και απορροφάται μέγιστα στα 595 nm.

* Η απορρόφηση στα 595 nm μετράται για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης της πρωτεΐνης.

Επομένως, ενώ η απορρόφηση μετράται στα 595 nm, δεν είναι η συνολική πρωτεΐνη που μετράται άμεσα, αλλά η αλλαγή χρώματος που προκαλείται από τη δέσμευση χρωστικής σε πρωτεΐνες.