Τι είναι η πλάκα LB στην κατασκευή αρμόδιων κυττάρων;
1. Μέσο ανάπτυξης: Το Agar LB παρέχει ένα πλούσιο σε θρεπτικά συστατικά περιβάλλον για να αναπτυχθούν και να πολλαπλασιαστούν τα βακτήρια. Περιέχει απαραίτητα θρεπτικά συστατικά όπως το τρυπτόνη, το εκχύλισμα ζύμης και το χλωριούχο νάτριο, τα οποία υποστηρίζουν τη βακτηριακή ανάπτυξη και διαίρεση.
2. Επιλογή και αναγνώριση: Οι πλάκες LB μπορούν να συμπληρωθούν με ειδικά αντιβιοτικά, όπως αμπικιλλίνη ή καναμυκίνη. Αυτό επιτρέπει την επιλογή βακτηριακών αποικιών που έχουν μετατραπεί με πλασμίδιο που περιέχει το γονίδιο αντοχής στα αντιβιοτικά. Μόνο τα βακτήρια που μεταφέρουν το πλασμίδιο θα επιβιώσουν στην πλάκα LB που περιέχει αντιβιοτικά, επιτρέποντας την ταυτοποίηση επιτυχώς μετασχηματισμένων κυττάρων.
Στη διαδικασία κατασκευής αρμόδιων κυττάρων, χρησιμοποιούνται πλάκες LB για:
* Αναπτυξιακά βακτήρια: Τα αρχικά βακτήρια καλλιεργούνται για πρώτη φορά σε πλάκες LB για να αποκτήσουν μεγάλο αριθμό κυττάρων.
* Επιλογή μετασχηματισμένων κυττάρων: Μετά τον μετασχηματισμό, τα βακτήρια τοποθετούνται σε πλάκες LB που περιέχουν το κατάλληλο αντιβιοτικό. Μόνο τα μετασχηματισμένα κύτταρα που φέρουν το γονίδιο αντίστασης θα αναπτυχθούν, σχηματίζοντας αποικίες.
Βασικές πτυχές των πλακών LB στην παραγωγή αρμόδιων κυττάρων:
* Σύνθεση: Το Agar LB συνήθως περιέχει 1% τρυπτόνη, εκχύλισμα ζύμης 0,5%, 1% NaCl και 1,5% άγαρ.
* Θερμοκρασία: Οι πλάκες LB συνήθως επωάζονται στους 37 ° C, τη βέλτιστη θερμοκρασία για την ανάπτυξη βακτηρίων.
* Επιλογή αντιβιοτικών: Το συγκεκριμένο χρησιμοποιούμενο αντιβιοτικό εξαρτάται από το πλασμίδιο που χρησιμοποιείται για μετασχηματισμό.
* Σχηματισμός αποικίας: Μετά την επώαση, τα μετασχηματισμένα βακτήρια θα σχηματίσουν ορατές αποικίες στην πλάκα LB, οι οποίες στη συνέχεια μπορούν να αναλυθούν περαιτέρω.
Συνοπτικά: Οι πλάκες LB παρέχουν ένα κατάλληλο μέσο για την ανάπτυξη βακτηρίων και επιτρέπουν την επιλογή μετασχηματισμένων κυττάρων με βάση την αντίσταση στα αντιβιοτικά. Είναι ένα βασικό εργαλείο στη διαδικασία κατασκευής αρμόδιων κυττάρων για κλωνοποίηση γονιδίων και άλλες τεχνικές μοριακής βιολογίας.
