Εξηγήστε τον χημικό μηχανισμό για την ανίχνευση ινδόλης σε μια βακτηριακή καλλιέργεια;
1. Δοκιμή αντιδραστηρίου Kovac:
* Μηχανισμός: Αυτή η μέθοδος βασίζεται στην αντίδραση της ινδόλης με p-διμεθυλαμινοβενζαλδεΰδη (DMAB) , ένα αντιδραστήριο στο αντιδραστήριο του Kovac. Παρουσία υδροχλωρικού οξέος (HCl), η ινδολιά αντιδρά με DMAB για να σχηματίσει μια έγχρωμη ένωση, rosindole , που εμφανίζεται ως δακτύλιος κόκκινου-purple Στη διεπαφή του μέσου αντιδραστηρίου και καλλιέργειας.
* βήματα:
1. Προσθέστε μερικές σταγόνες αντιδραστηρίου του Kovac στην επιφάνεια της βακτηριακής καλλιέργειας.
2. Παρατηρήστε για ένα κόκκινο-μοβ δαχτυλίδι στη διεπαφή.
3. Μια θετική δοκιμή υποδεικνύει την παρουσία ινδόλης που παράγεται από τα βακτήρια.
* Ειδικότητα: Το αντιδραστήριο του Kovac είναι ιδιαίτερα ειδικό για την ινδόλη και δεν αντιδρά με άλλους μεταβολίτες της τρυπτοφάνης. Ωστόσο, άλλες ουσίες όπως ο σκέτολ μπορούν επίσης να παράγουν μια παρόμοια αντίδραση χρώματος.
* Ευαισθησία: Αυτή η δοκιμή είναι αρκετά ευαίσθητη για να ανιχνεύσει μικρές ποσότητες ινδόλης.
2. Δοκιμή αντιδραστηρίου του Ehrlich:
* Μηχανισμός: Το αντιδραστήριο του Ehrlich, που περιέχει p-διμεθυλαμινοβενζαλδεΰδη (DMAB) σε ένα μίγμα αιθανόλης και υδροχλωρικού οξέος , αντιδρά με ινδόλη για να σχηματίσει μια έγχρωμη έγχρωμη έγχρωμη ένωση . Αυτή η αντίδραση συμβαίνει λόγω του σχηματισμού μιας quinoidal δομής στο προϊόν.
* βήματα:
1. Προσθέστε μια μικρή ποσότητα αντιδραστηρίου του Ehrlich στην βακτηριακή καλλιέργεια.
2. Παρατηρήστε για μια αλλαγή χρώματος με κόκκινο βολικό.
3. Μια θετική δοκιμή υποδεικνύει την παρουσία ινδόλης.
* Ειδικότητα: Παρόμοια με το αντιδραστήριο του Kovac, το αντιδραστήριο του Ehrlich είναι ειδικό για την ινδόλη. Ωστόσο, μπορεί να αντιδράσει με άλλα παράγωγα ινδόλης όπως ο σκέ συνάλος.
* Ευαισθησία: Το αντιδραστήριο του Ehrlich θεωρείται γενικά λιγότερο ευαίσθητο από το αντιδραστήριο του Kovac.
Άλλες μέθοδοι:
* χρωματογραφία: Η ινδόλη μπορεί να διαχωριστεί και να ταυτοποιηθεί χρησιμοποιώντας τεχνικές χρωματογραφίας αερίου (GC) ή υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC). Αυτή η μέθοδος είναι πιο ευαίσθητη και συγκεκριμένη από τις χρωματομετρικές μεθόδους.
* φασματοφωτομετρία: Η ινδόλη μπορεί να ανιχνευθεί και να ποσοτικοποιηθεί με μέτρηση της απορρόφησης του διαλύματος της σε συγκεκριμένα μήκη κύματος χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο.
Παραγωγή ινδολλών και η σημασία της:
* Πηγή: Μερικά βακτήρια, ιδιαίτερα εκείνα που ανήκουν στο γένος *e. Coli*, παράγουν ινδόλη ως υποπροϊόν του μεταβολισμού της τρυπτοφάνης.
* Κλινική σημασία: Η ικανότητα παραγωγής ινδόλης είναι ένα χαρακτηριστικό που χρησιμοποιείται στην ταυτοποίηση και τη διαφοροποίηση των βακτηρίων. Η παραγωγή Indole μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη διάκριση *e. Coli* από άλλα μέλη Enterobacteriaceae.
* Άλλες εφαρμογές: Η Indole έχει επίσης ρόλο στην ανίχνευση βακτηριακής απαρτίας και μπορεί να επηρεάσει τον σχηματισμό και τη μολυσματικότητα του βιοφίλμ.
Αυτές οι δοκιμές είναι σημαντικά εργαλεία στη μικροβιολογία για τον εντοπισμό των βακτηρίων και την κατανόηση των μεταβολικών τους δυνατοτήτων.
