Γιατί η μετουσίωση του DNA ακολουθείται από ταχεία ψύξη;
* Η μετουσίωση σπάει τους δεσμούς υδρογόνου: Όταν θερμαίνονται το DNA, οι δεσμοί υδρογόνου που συγκρατούν τα δύο συμπληρωματικά σκέλη μαζί σπάζουν, οδηγώντας στον διαχωρισμό των κλώνων. Αυτή η διαδικασία ονομάζεται μετουσίωση.
* Η ταχεία ψύξη προωθεί την επανεξέταση: Όταν το διάλυμα ψύχεται γρήγορα, οι χωρισμένοι κλώνοι DNA ξαφνικά βρίσκονται σε ένα περιβάλλον όπου οι δεσμοί υδρογόνου είναι πιο πιθανό να μεταρρυθμιστούν. Αυτή η ταχεία ψύξη δεν δίνει στους σκέλη πολύ χρόνο για να μετακινηθεί και να βρει άλλες συμπληρωματικές ακολουθίες, οπότε είναι πιο πιθανό να επαναπροσδιορίσουν με τους αρχικούς συνεργάτες τους.
* Η επανεξέταση επιτρέπει την ανάλυση: Αυτή η διαδικασία επανεξέτασης είναι ζωτικής σημασίας για πολλές τεχνικές που περιλαμβάνουν DNA, όπως:
* PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης): Μετά από μετουσίωση, η θερμοκρασία μειώνεται για να επιτρέψει στους εκκινητές να δεσμεύονται στο μονόκλωνο DNA και να ξεκινήσουν την αντιγραφή.
* Κλαύση Southern: Αυτή η τεχνική χρησιμοποιεί ανιχνευτές που επισημαίνονται με ραδιενεργό ή φθορίζον ετικέτα για την ανίχνευση συγκεκριμένων αλληλουχιών DNA. Το ανανεωμένο DNA μεταφέρεται σε μεμβράνη, όπου μπορεί να ανιχνευθεί.
* υβριδισμός DNA: Αυτή η τεχνική περιλαμβάνει την ανάμιξη θραυσμάτων DNA από διαφορετικές πηγές για να διαπιστωθεί εάν μοιράζονται συμπληρωματικές αλληλουχίες.
Συνοπτικά, η ταχεία ψύξη μετά από μετουσίωση DNA βοηθά:
* Διατηρήστε την αρχική αλληλουχία DNA προωθώντας την αναδημιουργία των χωριστών κλώνων.
* Ενεργοποιήστε περαιτέρω ανάλυση του DNA δημιουργώντας μια δομή διπλής έλικας που είναι πιο σταθερή και επιδεκτική σε διαφορετικές τεχνικές.
Σημείωση: Ο ρυθμός ψύξης μπορεί να επηρεάσει την αποτελεσματικότητα της επανασύνδεσης. Πολύ αργή διαδικασία ψύξης μπορεί να επιτρέψει στα σκέλη να αλληλεπιδρούν τυχαία, οδηγώντας σε κακομεταχείριση και μειωμένη απόδοση.
