Ποιες θα είναι οι θέσεις του πλασμιδίου γονιδιωματικού ϋΝΑ και του RNA σε ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης;
1. Γονιδιωματικό ϋΝΑ
* Μετανάστευση: Το γονιδιωματικό ϋΝΑ θα εμφανίζεται συνήθως ως smear Στην κορυφή του πηκτώματος.
* Λόγος: Το γονιδιωματικό DNA είναι πολύ μεγάλο και ετερογενές (ένα μείγμα διαφορετικών μεγεθών). Τα μεγαλύτερα θραύσματα θα μετακινηθούν το πιο αργό, ενώ τα μικρότερα θραύσματα θα μεταναστεύσουν περαιτέρω. Αυτό έχει ως αποτέλεσμα μια εμφάνιση.
2. Πλασμίδιο DNA
* Μετανάστευση: Τα πλασμίδια θα εμφανίζονται ως ξεχωριστές ζώνες , συχνά πολλαπλές ζώνες.
* Λόγος: Τα πλασμίδια είναι κυκλικά, σχετικά μικρά μόρια DNA. Μπορούν να υπάρχουν διαφορετικές μορφές του πλασμιδίου (υπερσυμπιεστή, χαλαρή κυκλική, γραμμική). Κάθε μορφή έχει διαφορετικό ρυθμό μετανάστευσης, οδηγώντας σε πολλαπλές ζώνες.
3. RNA
* Μετανάστευση: Το RNA θα εμφανιστεί επίσης ως συγκροτήματα , αλλά το μέγεθος και η θέση θα εξαρτηθούν από το συγκεκριμένο μόριο RNA.
* Λόγος: Το RNA είναι γενικά μονόκλωνο και συχνά μικρότερο από το γονιδιωματικό DNA. Ωστόσο, μπορεί να κυμαίνεται σε μέγεθος από μικρά ριβοσωμικά RNAs σε μεγάλα RNA Messenger.
Σημαντικές εκτιμήσεις:
* συγκέντρωση πηκτής: Η συγκέντρωση της αγαρόζης στο πήκτωμα επηρεάζει τη μετανάστευση. Οι υψηλότερες συγκεντρώσεις επιβραδύνουν όλα τα μόρια.
* buffer: Το ρυθμιστικό διάλυμα που χρησιμοποιείται για ηλεκτροφόρηση επηρεάζει το φορτίο και τη μετανάστευση των μορίων.
* συνθήκες ηλεκτροφόρησης: Η τάση και ο χρόνος επηρεάζουν επίσης το πόσο μακριά τα μόρια μεταναστεύουν.
* Δείκτες μεγέθους: Χρησιμοποιώντας δείκτες μεγέθους (σκάλες DNA ή RNA) παράλληλα με τα δείγματα σας είναι ζωτικής σημασίας για τον προσδιορισμό του κατά προσέγγιση μεγέθους των μορίων σας.
Συνοπτικά:
* Γονιδιωματικό DNA: Κρατήστε κοντά στην κορυφή του πηκτώματος.
* DNA πλασμιδίου: Ξεχωριστές ζώνες, συχνά πολλαπλές ζώνες.
* RNA: Ζώνες, με θέσεις ανάλογα με τα συγκεκριμένα μόρια RNA.
Επιτρέψτε μου να ξέρω αν θα θέλατε να επεξεργαστώ σε οποιαδήποτε συγκεκριμένη πτυχή!
