Πώς διατηρείτε τον ανασυνδυασμένο οργανισμό;
1. Βακτηριακά στελέχη:
* κατάψυξη σε απόθεμα γλυκερόλης: Η πιο συνηθισμένη μέθοδος. Τα βακτήρια αναμειγνύονται με κρυοπροστατευτικό όπως η γλυκερόλη (συνήθως 15-20%) και καταψύχθηκαν στους -80 ° C. Αυτό επιβραδύνει τις μεταβολικές διεργασίες και εμποδίζει τον σχηματισμό κρυστάλλων πάγου που μπορεί να βλάψει τα κύτταρα.
* Λυοφιλοποίηση (ξήρανση κατάψυξης): Μια πιο σταθερή μέθοδος. Τα κύτταρα καταψύχθηκαν και στη συνέχεια αφυδατωμένα υπό κενό, αφαιρώντας όλο το περιεχόμενο του νερού. Αυτό δημιουργεί μια σκόνη που μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία δωματίου για χρόνια.
2. Στελέχη ζύμης:
* κατάψυξη σε απόθεμα γλυκερόλης: Παρόμοια με τα βακτηρίδια, τα στελέχη ζύμης καταψύχθηκαν σε ένα διάλυμα που περιέχει γλυκερόλη και αποθηκεύεται στους -80 ° C.
* Καλλιέργειες κλίσης άγαρ: Η ζύμη μπορεί να καλλιεργηθεί σε κλίση άγαρ (σωλήνες που περιέχουν μέσο άγαρ) και αποθηκεύονται στους 4 ° C. Αυτή η μέθοδος είναι λιγότερο σταθερή από την κατάψυξη, αλλά επιτρέπει την ταχύτερη ανάκαμψη.
3. Νηματοειδείς μύκητες:
* Αποθήκευση σπορίων: Εάν ο μύκητας παράγει σπόρια, μπορούν να συλλεχθούν και να αποθηκευτούν σε θερμοκρασία δωματίου ή σε καταψύκτη.
* κρυοσυντήρηση: Η κατάψυξη σε υγρό άζωτο ή άλλα κρυοπροστατευτικά χρησιμοποιείται για τη διατήρηση μυκητιακών μυκηλίων.
* Καταψύψτε: Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για ορισμένα μυκητιακά στελέχη.
4. Κυτταρικές σειρές θηλαστικών:
* κρυοσυντήρηση: Τα κύτταρα καταψύχονται σε υγρό άζωτο χρησιμοποιώντας κρυοπροστατευτικά όπως το διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO).
* Κυτταρική τραπεζική: Ειδικές εγκαταστάσεις αποθηκεύουν κυτταρικές σειρές υπό αυστηρές συνθήκες για να διατηρήσουν την ακεραιότητά τους.
5. Φυτικά κύτταρα και ιστούς:
* κρυοσυντήρηση: Παρόμοια με τα κύτταρα των θηλαστικών, τα φυτικά κύτταρα μπορούν να καταψυχθούν σε υγρό άζωτο με κρυοπροστατευτικά.
* Αποθήκευση σπόρων: Για τα φυτά που παράγουν σπόρους, η αποθήκευση σε χαμηλές θερμοκρασίες (π.χ. 4 ° C) ή σε τράπεζες σπόρων μπορεί να εξασφαλίσει μακροπρόθεσμη συντήρηση.
* Τισμός ιστού: Οι φυτικοί ιστοί μπορούν να καλλιεργηθούν in vitro και να διατηρηθούν σε χαμηλές θερμοκρασίες.
Βασικές εκτιμήσεις κατά τη διατήρηση ανασυνδυασμένων οργανισμών:
* Γενετική σταθερότητα: Η επιλεγμένη μέθοδος συντήρησης θα πρέπει να διασφαλίζει τη σταθερότητα του ανασυνδυασμένου γονιδίου με την πάροδο του χρόνου.
* Λειτουργικότητα: Ο οργανισμός θα πρέπει να παραμείνει σε θέση να εκφράσει το ανασυνδυασμένο γονίδιο μετά τη συντήρηση.
* Ευκολία ανάκτησης: Η μέθοδος θα πρέπει να επιτρέπει την αποτελεσματική ανάκτηση του οργανισμού με ελάχιστη απώλεια βιωσιμότητας.
* Κόστος και πόροι: Εξετάστε τους διαθέσιμους πόρους και τον προϋπολογισμό για τη συντήρηση.
Επιλέγοντας τη σωστή μέθοδο:
* Τύπος οργανισμού: Η μέθοδος εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τον συγκεκριμένο τύπο οργανισμού.
* Σκοπός της συντήρησης: Το αν ο οργανισμός αφορά την έρευνα, τη βιομηχανική παραγωγή ή τη διατήρηση επηρεάζει την επιλογή.
* Μακροπρόθεσμη ή βραχυπρόθεσμη αποθήκευση: Η μακροπρόθεσμη συντήρηση απαιτεί πιο ισχυρές μεθόδους από τη βραχυπρόθεσμη αποθήκευση.
Για συγκεκριμένες συμβουλές σχετικά με τη διατήρηση ενός συγκεκριμένου ανασυνδυασμένου οργανισμού, συμβουλευτείτε έναν ειδικό στον τομέα αυτό.
