Πώς εξετάζετε μικροσκοπικά βακτηρίδια;
1. Προετοιμασία δείγματος:
* Αποκτήστε ένα δείγμα: Συλλέξτε ένα δείγμα που περιέχει τα βακτήρια που θέλετε να παρατηρήσετε. Αυτό θα μπορούσε να προέρχεται από μια κουλτούρα, ένα στυλοβάτη ή ένα βιολογικό υγρό.
* Προετοιμάστε μια υγρή βάση:
* Καθαρές διαφάνειες: Χρησιμοποιήστε διαφάνειες καθαρού γυάλινων μικροσκοπίων και καλύμματα.
* Προσθήκη δείγματος: Τοποθετήστε μια μικρή σταγόνα της βακτηριακής ανάρτησης ή της καλλιέργειας στο κέντρο της διαφάνειας.
* Προσθήκη υγρού: Προσθέστε μια σταγόνα κατάλληλου μέσου τοποθέτησης στο δείγμα. Αυτό θα μπορούσε να είναι:
* νερό: Για απλές παρατηρήσεις.
* διάλυμα αλατούχου: Ισοτονικά σε βακτηριακά κύτταρα, ελαχιστοποιώντας το οσμωτικό στρες.
* θρεπτικό ζωμό: Για την παρατήρηση των βακτηρίων και τη διαίρεση.
* ΚΑΛΥΨΗ: Χαμηλώστε απαλά ένα κάλυμμα στην πτώση, εξασφαλίζοντας ότι δεν παγιδεύονται φυσαλίδες αέρα.
* Σφραγίδα (προαιρετικό): Για μακροπρόθεσμες παρατηρήσεις, μπορείτε να σφραγίσετε τις άκρες του καλύμματος με ζελέ ή βερνίκι νυχιών για να αποφύγετε την εξάτμιση.
2. Ρύθμιση μικροσκοπίου:
* Μικροσκοπία Brightfield: Αυτός είναι ο πιο συνηθισμένος τύπος για παρατήρηση ζωντανών βακτηρίων.
* αντικειμενικός φακός: Επιλέξτε έναν αντικειμενικό φακό υψηλής ισχύος (40x ή 100x).
* συμπυκνωτής: Ρυθμίστε τον συμπυκνωτή για να παρέχει βέλτιστο φωτισμό.
* Πηγή φωτός: Ρυθμίστε την ένταση του φωτός για να αποφευχθεί η υπερθέρμανση και η καταστροφή των βακτηρίων.
3. Παρατήρηση:
* Focus: Εστιάστε προσεκτικά το μικροσκόπιο στο δείγμα.
* Παρατηρήστε: Εξετάστε τα βακτήρια για τη μορφολογία (σχήμα), το μέγεθος και την κινητικότητα (κίνηση).
* Ρυθμίστε την εστίαση: Μπορεί να χρειαστεί να προσαρμόσετε την λεπτή εστίαση για να πάρετε μια σαφή εικόνα των διαφορετικών επιπέδων των βακτηρίων.
4. Σκέψεις:
* Έλεγχος θερμοκρασίας: Διατηρήστε το στάδιο του μικροσκοπίου σε θερμοκρασία κατάλληλη για βακτηριακή ανάπτυξη.
* Επίπεδο οξυγόνου: Εξασφαλίστε επαρκή οξυγόνωση για αερόβια βακτήρια.
* Διάρκεια: Παρατηρήστε τα βακτήρια για μια σύντομη περίοδο για να ελαχιστοποιήσετε το στρες και τον κυτταρικό θάνατο.
* Ειδικές τεχνικές: Για συγκεκριμένες εφαρμογές, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε:
* Μικροσκοπία αντίθεσης φάσης: Βελτιώνει την αντίθεση για την προβολή μη χρωματισμένων βακτηρίων.
* Μικροσκοπία Darkfield: Επισημαίνει τα βακτήρια σε ένα σκούρο φόντο.
* Μικροσκοπία φθορισμού: Επιτρέπει την απεικόνιση των βακτηρίων που επισημαίνονται με φθορίζοντα.
5. Προφυλάξεις ασφαλείας:
* Γάντια: Φορέστε γάντια όταν χειρίζεστε βακτηριακά δείγματα για να αποφύγετε τη μόλυνση.
* απολυμαντικό: Καθαρίστε το μικροσκόπιο και όλο τον εξοπλισμό με απολύτως μολυσματικό μετά τη χρήση.
* Απορρίψτε: Απορρίψτε τις χρησιμοποιημένες διαφάνειες και δείγματα σωστά μετά από κατευθυντήριες γραμμές για την ασφάλεια των εργαστηρίων.
Σημαντικές σημειώσεις:
* Πολιτιστικά μέσα: Εάν παρατηρείτε βακτηρίδια από μια κουλτούρα, βεβαιωθείτε ότι τα μέσα είναι κατάλληλα για την ανάπτυξή τους και ότι ο πολιτισμός βρίσκεται στην κατάλληλη φάση ανάπτυξης (π.χ. λογαριθμική φάση).
* χρώση: Ενώ η χρώση χρησιμοποιείται γενικά για σταθερά βακτήρια, ορισμένοι λεκέδες μπορούν να χρησιμοποιηθούν με ζωντανά βακτήρια. Ωστόσο, αυτοί οι λεκέδες μπορούν να επηρεάσουν τη βακτηριακή κινητικότητα και μπορεί να μην είναι κατάλληλοι για όλες τις εφαρμογές.
Θυμηθείτε: Η μικροσκοπική εξέταση των ζωντανών βακτηρίων απαιτεί προσεκτική ισορροπία μεταξύ της παρατήρησης και της διατήρησης της βιωσιμότητας των βακτηρίων. Ακολουθώντας αυτές τις κατευθυντήριες γραμμές, μπορείτε να βελτιώσετε τις πιθανότητές σας να αποκτήσετε εικόνες υψηλής ποιότητας και να κατανοήσετε τον δυναμικό κόσμο των ζωντανών βακτηρίων.
