Πώς δημιουργείτε μια κουλτούρα βακτηρίων σε μια πλάκα άγαρ;
Υλικά
* Πλάκες άγαρ: Τα αποστειρωμένα πιάτα Petri που περιέχουν ένα στερεοποιημένο θρεπτικό μέσο (άγαρ).
* βακτήρια: Τα επιλεγμένα βακτηρίδια σας. Αυτό θα μπορούσε να είναι ένα δείγμα από το περιβάλλον, ένα εργαστηριακό στέλεχος ή έναν συγκεκριμένο τύπο που μελετάτε.
* Αποστειρωμένος βρόχος εμβολιασμού/βελόνα: Ένα εργαλείο για τη μεταφορά βακτηρίων.
* Bunsen Burner ή LAMB LAMP: Χρησιμοποιείται για την αποστείρωση του βρόχου και τη δημιουργία αποστειρωμένου χώρου εργασίας.
* incubator (προαιρετικό): Χρησιμοποιείται για τη βέλτιστη θερμοκρασία ανάπτυξης.
* Γάντια: Φορέστε γάντια για να διατηρήσετε την στειρότητα και να προστατεύσετε τον εαυτό σας από τη μόλυνση.
Διαδικασία
1. Προετοιμάστε το χώρο εργασίας σας:
* Απολύστε το χώρο εργασίας σας με διάλυμα απολυμαντικού (π.χ., 70% ισοπροπυλική αλκοόλη).
* Ενεργοποιήστε τον καυστήρα Bunsen ή τον λαμπτήρα αλκοόλ. Η φλόγα δημιουργεί μια αποστειρωμένη ζώνη γύρω της.
* ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πάντα να εργάζεστε κοντά στη φλόγα, καθώς τα ρεύματα αέρα μπορούν να εισαγάγουν μολυσματικές ουσίες.
2. Αποστείξτε τον βρόχο/βελόνα σας εμβολιασμού:
* Κρατήστε το βρόχο/βελόνα στο πιο καυτό τμήμα της φλόγας μέχρι να λάμψει κόκκινη ζεστή.
* Αφήστε το να κρυώσει ελαφρώς πριν μεταφέρετε τα βακτήρια.
3. Αποκτήστε το βακτηριακό σας δείγμα:
* από μια κουλτούρα: Ανοίξτε προσεκτικά τον σωλήνα καλλιέργειας ή τη φιάλη που περιέχει τα βακτήρια σας, κρατώντας το καπάκι/πώμα πάνω από το άνοιγμα για να αποφύγετε τη μόλυνση.
* από το περιβάλλον: Εάν εργάζεστε με δείγμα από το περιβάλλον (π.χ. έδαφος, νερό), αποστειρώστε την επιφάνεια του δείγματος, εάν είναι δυνατόν (όπως με φλόγα).
* από ένα στρώμα: Εάν χρησιμοποιείτε ένα στίγμα, βεβαιωθείτε ότι είναι αποστειρωμένο και χειριστείτε προσεκτικά για να αποφύγετε τη μόλυνση.
4. Ρύθμιση της πλάκας:
* Ανοίξτε την πλάκα άγαρ σας υπό γωνία, κρατώντας το καπάκι πάνω από το άνοιγμα.
* Χρησιμοποιώντας τον αποστειρωμένο βρόχο/βελόνα, αγγίξτε την βακτηριακή σας πηγή και στη συνέχεια κάντε μια ευθεία γραμμή στην επιφάνεια του άγαρ, αφήνοντας μια μικρή ποσότητα βακτηρίων.
* Αποστείξτε ξανά το βρόχο σας.
* τεταρτημόριο: Για να αποκτήσετε απομονωμένες αποικίες, εκτελέστε μια σειρά τεταρτημορίων. Περιστρέψτε την πλάκα 90 μοίρες και χρησιμοποιήστε τη γραμμή προηγουμένως ραβδωτή ως πηγή για να διαμορφώσετε μια δεύτερη γραμμή που επικαλύπτει ελαφρώς την πρώτη γραμμή. Επαναλάβετε για δύο ακόμη τεταρτημόρια.
5. επώαση (προαιρετική):
* Κλείστε σφιχτά την πλάκα άγαρ και επισημάνετε την με την ημερομηνία, το όνομα των βακτηρίων και τα αρχικά σας.
* Επωφεληθείτε από την πλάκα στη βέλτιστη θερμοκρασία για τα βακτήρια σας (συνήθως 37 ° C για τα περισσότερα βακτήρια).
Σημαντικές εκτιμήσεις:
* στειρότητα: Διατηρήστε την ασηπτική τεχνική καθ 'όλη τη διάρκεια της διαδικασίας για να αποτρέψετε τη μόλυνση.
* Ο σωστός χειρισμός: Χειριστείτε προσεκτικά τις πλάκες για να αποφύγετε διαρροές ή διαλείμματα.
* διάθεση: Απορρίψτε σωστά τα χρησιμοποιούμενα υλικά, συμπεριλαμβανομένων των πλακών άγαρ, ακολουθώντας τα πρωτόκολλα ασφαλείας του εργαστηρίου σας.
Συμβουλές:
* Χρησιμοποιήστε έναν αποστειρωμένο βρόχο εμβολιασμού για κάθε νέα σειρά για να αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση.
* Εάν εργάζεστε με επικίνδυνα βακτήρια, χρησιμοποιήστε ένα βιολογικό υπουργικό συμβούλιο.
* Εάν δεν είστε σίγουροι για οποιαδήποτε πτυχή αυτής της διαδικασίας, συμβουλευτείτε τον εκπαιδευτή εργαστηρίου σας ή έναν ειδικευμένο μικροβιολόγο.
Ενημερώστε με αν έχετε συγκεκριμένες ερωτήσεις ή θέλετε περισσότερες λεπτομέρειες σε οποιοδήποτε βήμα!
