Πώς μεταφέρεται το ανασυνδυασμένο DNA;
Εδώ μεταφέρεται το ανασυνδυασμένο DNA:
1. Επιλογή φορέα: Ένας φορέας είναι ένας φορέας που παραδίδει το ανασυνδυασμένο DNA σε ένα κύτταρο ξενιστή. Οι συνήθεις φορείς περιλαμβάνουν:
* πλασμίδια: Τα κυκλικά κομμάτια του DNA βρέθηκαν φυσικά σε βακτήρια.
* βακτηριοφάγοι: Ιοί που μολύνουν τα βακτήρια.
* ιοί: Μπορεί να τροποποιηθεί για να μεταφέρει το rDNA σε ευκαρυωτικά κύτταρα (όπως τα ζώα ή τα φυτικά κύτταρα).
* cosmids: Υβριδικοί φορείς που συνδυάζουν χαρακτηριστικά πλασμιδίων και βακτηριοφάγων.
2. Εισαγωγή του rDNA σε φορέα: Το επιθυμητό γονίδιο (το rDNA) εισάγεται στον φορέα χρησιμοποιώντας συγκεκριμένα ένζυμα.
* Ένζυμα περιορισμού: Κόψτε το DNA σε συγκεκριμένες ακολουθίες, δημιουργώντας "κολλώδη άκρα" για την ένταξη θραυσμάτων.
* ένζυμα λιγάσης: Συμμετάσχετε στα κολλώδη άκρα του rDNA και του φορέα DNA, σχηματίζοντας ένα ανασυνδυασμένο μόριο.
3. Μετασχηματισμός ή επιμόλυνση: Ο ανασυνδυασμένος φορέας εισάγεται σε ένα κελί ξενιστή.
* Μετασχηματισμός: Διαδικασία όπου τα βακτηρίδια παίρνουν ξένο DNA από το περιβάλλον τους.
* επιμόλυνση: Διαδικασία εισαγωγής ξένου DNA σε ευκαρυωτικά κύτταρα χρησιμοποιώντας τεχνικές όπως η ηλεκτροδιάτρηση, η λιποεπίγραφη ή η μεταγωγή του ιού.
4. Επιλογή και ενίσχυση: Τα κύτταρα που έχουν επιτύχει επιτυχώς τον ανασυνδυασμένο φορέα επιλέγονται χρησιμοποιώντας συγκεκριμένους δείκτες (π.χ. γονίδια αντοχής στα αντιβιοτικά). Αυτά τα κύτταρα στη συνέχεια αναπτύσσονται σε καλλιέργεια, ενισχύοντας το rDNA.
Παραδείγματα μεθόδων μεταφοράς:
* Ηλεκτροδιάκριση: Ένας σύντομος ηλεκτρικός παλμός εφαρμόζεται στην κυτταρική μεμβράνη, δημιουργώντας προσωρινούς πόρους που επιτρέπουν την είσοδο του ανασυνδυασμένου DNA.
* Lipofection: Το ανασυνδυασμένο ϋΝΑ ενθυλακωμένο σε κυστίδια λιπιδίων, τα οποία συγχωνεύονται με την κυτταρική μεμβράνη και παραδίδουν το DNA στο κυτταρόπλασμα.
* μεταγωγή ιού: Το ανασυνδυασμένο DNA συσκευάζεται σε έναν ιό, ο οποίος μολύνει το κύτταρο ξενιστή και παραδίδει το DNA.
Βασικές εκτιμήσεις:
* Αποδοτικότητα: Η αποτελεσματικότητα της διαδικασίας μεταφοράς μπορεί να ποικίλει ανάλογα με τον φορέα, το κύτταρο ξενιστή και τη μέθοδο που χρησιμοποιείται.
* Ειδικότητα: Ο τύπος κυττάρου -στόχου πρέπει να επιλέγεται προσεκτικά για να διασφαλιστεί ότι το ανασυνδυασμένο DNA εκφράζεται σωστά.
* Ασφάλεια: Υπάρχουν ανησυχίες σχετικά με τη δυνατότητα να εξαπλωθεί το rDNA σε άλλους οργανισμούς ή να προκαλέσει ακούσιες συνέπειες.
Συνοπτικά, Η μεταφορά του ανασυνδυασμένου ϋΝΑ είναι μια πολύπλοκη διαδικασία που περιλαμβάνει την επιλογή ενός κατάλληλου φορέα, την εισαγωγή του rDNA στον φορέα, την εισαγωγή του ανασυνδυασμένου φορέα σε ένα κύτταρο ξενιστή και την επιλογή και την ενίσχυση των κυττάρων που περιέχουν το rDNA. Αυτές οι τεχνικές είναι απαραίτητες για τις εφαρμογές στην ιατρική, τη γεωργία και την έρευνα.
