Ποιος είναι ο σκοπός της βροχόπτωσης των πρωτεϊνών;
1. Αφαίρεση ανεπιθύμητων πρωτεϊνών:
* Με επιλεκτικά κατακρημνίζοντας την πρωτεΐνη ενδιαφέροντος, άλλες πρωτεΐνες και μολυσματικές ουσίες μπορούν να απομακρυνθούν από το διάλυμα.
* Αυτό επιτρέπει μια πιο εστιασμένη ανάλυση της πρωτεΐνης ενδιαφέροντος, μειώνοντας τις παρεμβολές από άλλα μόρια.
2. Συγκέντρωση πρωτεϊνών:
* Η κατακρήμνιση μπορεί να συγκεντρώσει πρωτεΐνες με την απομάκρυνσή τους από το διάλυμα, αυξάνοντας τη συγκέντρωσή τους στο υπόλοιπο διάλυμα.
* Αυτό είναι χρήσιμο για τη μελέτη πρωτεϊνών που υπάρχουν σε χαμηλές συγκεντρώσεις.
3. Προετοιμασία για ανάλυση κατάντη:
* Η βροχόπτωση μπορεί να παρασκευάσει πρωτεΐνες για περαιτέρω ανάλυση όπως:
* ηλεκτροφόρηση πηκτής: Για να διαχωρίσετε τις πρωτεΐνες με βάση το μέγεθος και τη φόρτιση.
* φασματομετρία μάζας: Για τον προσδιορισμό και τον ποσοτικό προσδιορισμό των πρωτεϊνών.
* Κρυστάλλωση: Για δομικές μελέτες.
4. Αφαίρεση παρεμβολών ουσιών:
* Η κατακρήμνιση μπορεί να αφαιρέσει ουσίες που παρεμβαίνουν στην ανάλυση πρωτεϊνών, όπως άλατα ή απορρυπαντικά.
Πώς λειτουργεί:
Η καθίζηση της πρωτεΐνης βασίζεται στην αλλαγή της διαλυτότητας των πρωτεϊνών. Αυτό επιτυγχάνεται συνήθως από:
* Αλλαγή του pH: Η μετατόπιση του ρΗ μακριά από το ισοηλεκτρικό σημείο της πρωτεΐνης (PI) μπορεί να μειώσει τη διαλυτότητα του και να την προκαλέσει να καταβυθιστεί.
* Προσθήκη αλάτων (Salting Out): Οι υψηλές συγκεντρώσεις άλατος μπορούν να διαταράξουν το κέλυφος ενυδάτωσης γύρω από τις πρωτεΐνες, προκαλώντας τους να καταβυθιστούν.
* Προσθήκη οργανικών διαλυτών: Οι διαλύτες όπως η αιθανόλη ή η ακετόνη μπορούν να αφυδατώνει τις πρωτεΐνες και να μειώσουν τη διαλυτότητα τους.
* Χρησιμοποιώντας συγκεκριμένους παράγοντες δέσμευσης: Ορισμένοι παράγοντες όπως το τριχλωροξικό οξύ (TCA) ή το θειικό αμμώνιο μπορούν να αλληλεπιδρούν άμεσα με τις πρωτεΐνες και να τους προκαλέσουν να καταβυθιστούν.
Σημαντική σημείωση: Η κατακρήμνιση της πρωτεΐνης δεν είναι πάντα μια τέλεια τεχνική. Μπορεί μερικές φορές να οδηγήσει σε:
* Απώλεια πρωτεϊνικής δραστηριότητας: Ορισμένες πρωτεΐνες μπορούν να μετουσιωθούν κατά τη διάρκεια της διαδικασίας, επηρεάζοντας τη λειτουργία τους.
* Συντονισμός ανεπιθύμητων πρωτεϊνών: Ορισμένες πρωτεΐνες μπορεί να κατακρημνιστούν μαζί με την πρωτεΐνη ενδιαφέροντος, μειώνοντας την καθαρότητα του τελικού προϊόντος.
Παρά τους περιορισμούς αυτούς, η βροχόπτωση των πρωτεϊνών παραμένει ένα πολύτιμο εργαλείο σε πολλές βιοχημικές και βιολογικές μελέτες.
