Πώς υπολογίζετε τη συγκέντρωση της ξανθοφύνης στην αιθανόλη;
Κατανόηση της διαδικασίας
* Εξαγωγή: Η ξανθοφύλλη εξάγεται από ένα αρχικό υλικό (π.χ. φύλλα φυτών) χρησιμοποιώντας αιθανόλη.
* φασματοφωτομετρία: Η συγκέντρωση της ξανθοφύλλη στο διάλυμα αιθανόλης προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο. Η ξανθοφύλλη απορροφά το φως σε συγκεκριμένα μήκη κύματος και η ποσότητα του φωτός που απορροφάται είναι ανάλογη με τη συγκέντρωσή του.
Μέθοδοι
Ακολουθούν δύο κοινές μέθοδοι για τον υπολογισμό της συγκέντρωσης ξανθοφυλίας:
1. Χρησιμοποιώντας μια τυπική καμπύλη
* Προετοιμάστε μια τυπική λύση: Αποκτήστε ένα καθαρό πρότυπο Xanthophyll. Διαλύστε ένα γνωστό βάρος του προτύπου στην αιθανόλη για να δημιουργήσετε ένα διάλυμα αποθέματος γνωστής συγκέντρωσης.
* Δημιουργήστε μια τυπική καμπύλη: Αραιώστε το διάλυμα αποθέματος για να δημιουργήσετε μια σειρά λύσεων με γνωστές συγκεντρώσεις (π.χ., 10, 20, 30, 40, 50 μg/ml).
* Μετρήστε την απορρόφηση: Χρησιμοποιήστε ένα φασματοφωτόμετρο για να μετρήσετε την απορρόφηση κάθε τυποποιημένου διαλύματος στο μέγιστο μήκος κύματος απορρόφησης για ξανθοφύλλη (συνήθως περίπου 440-450 nm).
* Σχεδιάστε την τυπική καμπύλη: Σχεδιάστε τις τιμές απορρόφησης στον άξονα y και τις αντίστοιχες συγκεντρώσεις στον άξονα x. Αυτό θα δημιουργήσει μια γραμμική σχέση μεταξύ απορρόφησης και συγκέντρωσης.
* Μετρήστε άγνωστο δείγμα: Εκτελέστε το εκχυλισμένο δείγμα ξανθοφύλλης μέσω του φασματοφωτόμετρο στο ίδιο μήκος κύματος. Βρείτε την αντίστοιχη συγκέντρωση στην τυπική καμπύλη σας με βάση τη μετρούμενη απορρόφηση.
2. Χρήση νόμου Beer-Lambert
* Νόμος Beer-Lambert: Αυτός ο νόμος δηλώνει ότι η απορρόφηση (α) είναι άμεσα ανάλογη με τη συγκέντρωση (c) του αναλύτη και το μήκος διαδρομής (L) της δέσμης φωτός μέσω του διαλύματος. Η εξίσωση είναι:a =εcc, όπου ε είναι η μοριακή απορροφητικότητα (μια σταθερά ειδική για τον αναλυτή).
* Προσδιορίστε τη μοριακή απορροφητικότητα (ε): Αυτή η τιμή παρέχεται συνήθως στη βιβλιογραφία ή μπορεί να προσδιοριστεί πειραματικά χρησιμοποιώντας μια τυπική λύση.
* Μετρήστε την απορρόφηση: Μετρήστε την απορρόφηση του εκχυλισμένου δείγματος Xanthophyll στο μέγιστο μήκος κύματος απορρόφησης.
* Υπολογίστε τη συγκέντρωση: Αναδιατάξτε την εξίσωση του νόμου για την μπύρα-Lambert για επίλυση για συγκέντρωση:c =a / (εL).
Σκέψεις:
* Απόδοση εκχύλισης: Βεβαιωθείτε ότι η διαδικασία εκχύλισης είναι αποτελεσματική και ότι όλη η ξανθοφύλλη έχει εξαχθεί από το αρχικό υλικό.
* Καθαρότητα διαλύτη: Χρησιμοποιήστε αιθανόλη υψηλής ποιότητας για να αποφύγετε παρεμβολές από ακαθαρσίες.
* Βαθμονόμηση: Πάντα να βαθμονομείτε το φασματοφωτόμετρο σας πριν από τις μετρήσεις για να εξασφαλίσετε ακριβή αποτελέσματα.
* Επιλογή μήκους κύματος: Επιλέξτε το σωστό μήκος κύματος για μέγιστη απορρόφηση της ξανθοφύλλη (συνήθως περίπου 440-450 nm).
* παρεμβολές ενώσεις: Να γνωρίζετε ότι άλλες χρωστικές ουσίες στο δείγμα σας μπορεί να απορροφήσουν σε παρόμοια μήκη κύματος. Εάν είναι απαραίτητο, χρησιμοποιήστε μια μέθοδο για να διαχωρίσετε το Xanthophyll από αυτές τις παρεμβαλλόμενες ενώσεις.
Παράδειγμα υπολογισμού:
Ας υποθέσουμε ότι έχετε εκχύλισμα ξανθοφύλλης σε αιθανόλη με απορρόφηση 0,500 στα 450 nm. Η μοριακή απορροφητικότητα (ε) ξανθοφύλλη στα 450 nm είναι 25.000 m⁻cm⁻⁻ και το μήκος διαδρομής (L) της κυψελίδας σας είναι 1 cm.
Χρήση του νόμου περί μπύρας-Lambert:
c =a / (εL)
C =0.500 / (25.000 m⁻cm⁻ × 1 cm)
C =2,0 × 10⁻⁵ M (ή 20 μm)
Σημαντική σημείωση: Αυτό είναι ένα απλοποιημένο παράδειγμα. Η συγκεκριμένη μέθοδος και οι υπολογισμοί θα εξαρτηθούν από τις συγκεκριμένες περιστάσεις και τον εξοπλισμό που χρησιμοποιείτε. Συμβουλευτείτε πάντα τη σχετική βιβλιογραφία και τα πρωτόκολλα για ακριβή αποτελέσματα.
