Γιατί τα θραύσματα DNA πρέπει να εκτίθενται σε αλκαλικό διάλυμα πριν από τον υβριδισμό;

Τα θραύσματα DNA είναι όχι Τυπικά εκτίθεται σε αλκαλικό διάλυμα πριν παραγωγή μικτών γενών. Στην πραγματικότητα, κάτι τέτοιο θα ήταν επιζήμιο για τη διαδικασία.

Εδώ είναι γιατί:

* αλκαλικά διαλύματα DNA DNA: Τα διαλύματα υψηλού ρΗ (αλκαλικά) σπάζουν τους δεσμούς υδρογόνου που συγκρατούν μαζί τα δύο κλώνους του DNA, οδηγώντας σε μονόκλωνο DNA. Ενώ αυτό μπορεί να φαίνεται χρήσιμο για τον υβριδισμό, θα μετρώσει επίσης τους ανιχνευτές που χρησιμοποιούνται στη διαδικασία, καθιστώντας τους αναποτελεσματικές.

* Η υβριδοποίηση βασίζεται σε μονόκλωνο DNA: Η υβριδοποίηση εμφανίζεται μεταξύ των συμπληρωματικών μορίων DNA μονόκλωνου ϋΝΑ . Ωστόσο, η διαδικασία μετουσίωσης πρέπει να ελέγχεται προσεκτικά.

Εδώ λειτουργεί η διαδικασία συνήθως:

1. Το DNA είναι μετουσιωμένο: Το DNA θερμαίνεται σε υψηλή θερμοκρασία (συνήθως περίπου 95 ° C) για να σπάσει τους δεσμούς υδρογόνου και να διαχωρίσει τους κλώνους.

2. υβριδισμός: Το μετουσιωμένο DNA (DNA στόχου) στη συνέχεια ψύχθηκε αργά, επιτρέποντας συμπληρωματικά σκέλη των ανιχνευτών να ανοσοποιηθούν (υβριδοποιούνται) στις αλληλουχίες στόχου.

3. Αλκαλική θεραπεία (προαιρετική): * Μετά από* υβριδοποίηση, ορισμένα πρωτόκολλα χρησιμοποιούν ένα ήπιο αλκαλικό διάλυμα για να απομακρυνθούν οι μη δεσμευμένοι ανιχνευτές.

Επομένως, η αλκαλική θεραπεία δεν χρησιμοποιείται πριν από τον υβριδισμό, αλλά μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε ορισμένα βήματα μετά την υβριδοποίηση για πλύσιμο και απομάκρυνση των μη δεσμευμένων ανιχνευτών.