Ποια είναι η χημεία της μέτρησης της μεθόδου Chod-PAP χοληστερόλης;
1. Υδρόλυση χοληστερόλης:
- Εστέρση χοληστερόλης (CE) υδρολύει εστέρες χοληστερόλης σε ελεύθερη χοληστερόλη και λιπαρά οξέα.
`` `
Χοληστερόλη εστέρα + H2O → χοληστερόλη + λιπαρό οξύ
`` `
2. Οξείδωση χοληστερόλης:
- Οξειδάση χοληστερόλης (Chod) Οξειδώνεται η ελεύθερη χοληστερόλη σε Cholest-4-En-3-one και υπεροξείδιο του υδρογόνου (H2O2).
`` `
Χοληστερόλη + Ο2 → Cholest-4-En-3-One + H2O2
`` `
3. Αντίδραση υπεροξειδάσης:
- υπεροξειδάση (POD) Καταλύει την αντίδραση μεταξύ H2O2 και ενός χρωμογόνου υποστρώματος, 4-αμινοφαινζόνης (4-AP) , παρουσία φαινόλης, τυπικά φαινόλη 4-αμινοαντιπυρρίνη (PAP) . Αυτό έχει ως αποτέλεσμα το σχηματισμό χρωματισμένης χρωστικής κινονεϊμίνης.
`` `
H2O2 + 4-AP + PAP → Χρώμα κινονοϊμίνης + H2O
`` `
Βασικά σημεία:
* Συνδυασμένες αντιδράσεις: Οι αντιδράσεις συνδέονται, που σημαίνει ότι το προϊόν μιας αντίδρασης χρησιμεύει ως υπόστρωμα για το επόμενο. Αυτό εξασφαλίζει ότι ο σχηματισμός του χρωματισμένου προϊόντος είναι άμεσα ανάλογος με την αρχική συγκέντρωση χοληστερόλης.
* Φασματοφωτομετρική μέτρηση: Η ένταση του χρωματισμένου προϊόντος μετράται χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο σε συγκεκριμένο μήκος κύματος. Η απορρόφηση είναι άμεσα ανάλογη με τη συγκέντρωση της χοληστερόλης.
* Βαθμονόμηση: Η μέθοδος απαιτεί μια καμπύλη βαθμονόμησης χρησιμοποιώντας γνωστά πρότυπα χοληστερόλης για να συσχετιστούν οι αναγνώσεις απορρόφησης σε συγκεντρώσεις χοληστερόλης.
Πλεονεκτήματα της μεθόδου chod-pap:
* υψηλή ευαισθησία και ακρίβεια
* Σχετικά απλή και γρήγορη
* ευρέως διαθέσιμο και τυποποιημένο
Μειονεκτήματα της μεθόδου chod-pap:
* μπορεί να επηρεαστεί από τη λιπιμία (υψηλά επίπεδα τριγλυκεριδίων) και την αιμόλυση
* απαιτεί εξειδικευμένα αντιδραστήρια και εξοπλισμό
Συνολικά, η μέθοδος CHOD-PAP είναι μια αξιόπιστη και ακριβής μέθοδος για τη μέτρηση των επιπέδων χοληστερόλης στο αίμα. Χρησιμοποιείται ευρέως σε κλινικά εργαστήρια και θεωρείται το χρυσό πρότυπο για τον προσδιορισμό της χοληστερόλης.
