Τι περιέχει η βαφή φόρτωσης;
1. Βαφή παρακολούθησης:
* Αυτό το στοιχείο σας επιτρέπει να παρακολουθείτε οπτικά την πρόοδο της ηλεκτροφόρησης.
* Είναι μια χρωματιστή βαφή που μεταναστεύει μέσω του πηκτώματος με προβλέψιμο ρυθμό.
* Τα κοινά παραδείγματα περιλαμβάνουν:
* Μπλε βρωμοφαινόλη: Μεταναστεύει με παρόμοια ταχύτητα σε ένα θραύσμα 300-400 bp του DNA.
* xylene cyanol ff: Μεταναστεύει με παρόμοια ταχύτητα σε ένα θραύσμα 4-6 kb του DNA.
2. Γλυκερόλη/σακχαρόζη:
* Αυτό το συστατικό κάνει το δείγμα πυκνότερο από το ρυθμιστικό διάλυμα, έτσι ώστε να βυθίζεται στο πηγάδι και δεν διαχέεται.
* Αυτό εξασφαλίζει ότι το δείγμα φορτώνεται σωστά και παραμένει συγκεντρωμένο στο κάτω μέρος του πηγαδιού.
3. Buffers:
* Αυτά τα συστατικά βοηθούν στη διατήρηση του ρΗ του δείγματος και του ρυθμιστικού διαλύματος κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης.
* Εξασφαλίζουν τη σωστή λειτουργία των ενζύμων που εμπλέκονται στη διαδικασία.
* Παραδείγματα περιλαμβάνουν τα ρυθμιστικά διαλύματα Tris-Borate-Edta (TBE) ή Tris-Acetate-Edta (TAE).
4. Άλλα πρόσθετα (προαιρετικά):
* SDS (δωδεκυλοθειικό νάτριο): Αυτό το απορρυπαντικό προστίθεται συχνά σε δείγματα πρωτεϊνών για να τα μετρώσει και να τα επικαλύψει με αρνητικό φορτίο, επιτρέποντάς τους να μεταναστεύσουν με βάση το μέγεθός τους.
* Μείωση των παραγόντων: Όπως η διθειοθερεϊτόλη (DTT) ή η β-μερκαπτοαιθανόλη, μερικές φορές προστίθενται για να σπάσουν δισουλφιδικά δεσμούς εντός πρωτεϊνών, περαιτέρω μετουσιοποίηση τους.
Βασικά σημεία που πρέπει να θυμάστε:
* Η συγκεκριμένη σύνθεση της βαφής φόρτωσης μπορεί να ποικίλει ανάλογα με τον τύπο της ηλεκτροφόρησης που εκτελείται (DNA, RNA ή πρωτεΐνη).
* Η επιλογή της βαφής παρακολούθησης θα πρέπει να είναι κατάλληλη για το εύρος μεγέθους των αναλύσεων των μορίων.
* Η βαφή φόρτωσης θα πρέπει να χρησιμοποιείται με φειδώ για να αποφευχθεί η εισαγωγή υπερβολικού όγκου στα πηγάδια, τα οποία μπορούν να επηρεάσουν την ανάλυση της ζώνης.
Επιτρέψτε μου να ξέρω αν έχετε άλλες ερωτήσεις!
