Ποια είναι η θεωρητική απορρόφηση στα 340 nm διαλύματος 0,01 Μ NADH;

Δεν μπορείτε να προσδιορίσετε τη θεωρητική απορρόφηση στα 340 nm διαλύματος 0,01 Μ του NADH χωρίς να γνωρίζετε τη μοριακή απορροφητικότητα του NADH σε αυτό το μήκος κύματος.

Εδώ είναι γιατί:

* Νόμος Beer-Lambert: Η σχέση μεταξύ της απορρόφησης, της συγκέντρωσης και του μήκους διαδρομής ορίζεται από τον νόμο περί μπύρας-Lambert:

* A =εBC

* Πού:

* A =απορρόφηση

* ε =μοριακή απορροφητικότητα (μια σταθερά ειδική για την ουσία και το μήκος κύματος)

* B =Μήκος διαδρομής (συνήθως 1 cm σε φασματοφωτόμετρα)

* c =συγκέντρωση

* Η μοριακή απορροφητικότητα είναι το κλειδί: Η μοριακή απορροφητικότητα (ε) είναι η ειδική απορρόφηση ενός διαλύματος 1 Μ της ουσίας σε μια κυψελίδα 1 cm σε ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος. Είναι μια σταθερά για μια δεδομένη ουσία και μήκος κύματος.

Για να βρείτε τη θεωρητική απορρόφηση, χρειάζεστε τα εξής:

1. Μοριακή απορροφητικότητα (ε) NADH στα 340 nm: Αυτή η τιμή συνήθως βρίσκεται σε βιβλία αναφοράς ή βάσεις δεδομένων για φασματοφωτομετρία.

2. Συγκέντρωση (c): Το δώσατε ως 0,01 μ.

3. Μήκος διαδρομής (b): Υποθέστε μια τυπική κυψελίδα 1 cm.

Μόλις έχετε αυτές τις τιμές, μπορείτε να υπολογίσετε την απορρόφηση χρησιμοποιώντας το νόμο Beer-Lambert.

Παράδειγμα:

Ας πούμε ότι η μοριακή απορροφητικότητα του NADH στα 340 nm είναι 6220 m⁻cm⁻⁻. Στη συνέχεια, η απορρόφηση θα ήταν:

A =(6220 m⁻cm⁻) (1 cm) (0,01 m) =62,2

Σημαντική σημείωση: Η θεωρητική απορρόφηση μπορεί να είναι ένας πολύ υψηλός αριθμός. Ωστόσο, τα φασματόμετρα πραγματικού κόσμου έχουν όρια στην απορρόφηση που μπορούν να μετρήσουν με ακρίβεια.