Ποια είναι η σύνθεση του μείγματος αντίδρασης σε PCR;

Το μίγμα της αντίδρασης σε PCR, γνωστό και ως Master PCR, αποτελείται από διάφορα βασικά συστατικά:

1. Πρότυπο DNA: Αυτή είναι η ακολουθία DNA που θέλετε να ενισχύσετε. Μπορεί να είναι γονιδιωματικό DNA, cDNA ή ακόμα και πλασμίδια.

2. Εκκινητές: Αυτές είναι σύντομες, μονόκλωνες αλληλουχίες DNA που είναι συμπληρωματικές με την αλληλουχία DNA στόχου. Συνδέονται σε συγκεκριμένες περιοχές του προτύπου DNA, πλαισιώνοντας την περιοχή που θέλετε να ενισχύσετε.

3. ΫΝΑ πολυμεράση: Αυτό το ένζυμο είναι υπεύθυνο για τη σύνθεση νέων κλώνων DNA. Πρέπει να είναι σταθερή θερμότητα, καθώς η PCR περιλαμβάνει επαναλαμβανόμενους κύκλους υψηλών θερμοκρασιών. Οι συνήθως χρησιμοποιούμενες πολυμεράσες περιλαμβάνουν πολυμεράση ΤΑΟΙ και πολυμεράση PFU.

4. Deoxynucleotide τριφωσφορικά (dntps): Αυτά είναι τα δομικά στοιχεία του DNA, που αποτελούνται από αδενίνη (Α), θυμίνη (Τ), γουανίνη (G) και κυτοσίνη (C). Η πολυμεράση DNA χρησιμοποιεί αυτά τα DNTPs για να συνθέσει νέους κλώνους DNA.

5. Buffer: Αυτό παρέχει ένα βέλτιστο περιβάλλον για τη λειτουργία της πολυμεράσης DNA. Περιέχει άλατα, ιόντα μαγνησίου (mg 2+ ) και άλλα συστατικά για τη διατήρηση του ρΗ και της ιοντικής αντοχής.

6. Νερό: Το νερό είναι απαραίτητο για τη διάλυση των αντιδραστηρίων και τη δημιουργία ενός κατάλληλου περιβάλλοντος αντίδρασης.

Προαιρετικά στοιχεία:

* Χλωριούχο μαγνήσιο (MGCL 2 ): Αυτός είναι ένας συμπαράγοντας που απαιτείται από την πολυμεράση DNA.

* πρόσθετα: Αυτά μπορούν να προστεθούν για τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας ή της εξειδίκευσης PCR, όπως το διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) ή το βεϊνικό.

* βαφή: Ορισμένα μίγματα Master PCR περιέχουν μια βαφή που επιτρέπει την παρακολούθηση της προόδου της αντίδρασης PCR κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης.

Συνοπτικά, η σύνθεση του μίγματος αντίδρασης PCR εξασφαλίζει ότι η αλληλουχία DNA στόχου ενισχύεται αποτελεσματικά και με ακρίβεια.