Ποια είναι η διαφορά μεταξύ ενός πλασμιδίου που έχει υποστεί πέψη και του πλασμιδίου διπλής πέψης

Η κύρια διαφορά μεταξύ ενός πλασμιδίου που έχει υποστεί πέψη και του πλασμιδίου διπλής πέψης είναι ότι τα μονά περιοριστικά ένζυμα καταλήγουν σε ένα μόνο χωνευμένο πλασμίδιο, ενώ δύο διαφορετικοί τύποι περιοριστικών ενζύμων καταλήγουν σε ένα πλασμίδιο διπλής πέψης. Επιπλέον, η εισαγωγή του ξένου θραύσματος DNA μπορεί να συμβεί και στους δύο προσανατολισμούς με πλασμίδια που έχουν υποστεί πέψη, ενώ η εισαγωγή του ξένου θραύσματος DNA γίνεται μόνο με τον σωστό προσανατολισμό με πλασμίδια διπλής πέψης.

Το πλασμίδιο με μία πέψη και το πλασμίδιο διπλής πέψης είναι δύο τύποι πλασμιδίων που χρησιμοποιούνται στην τεχνολογία ανασυνδυασμένου DNA για την παραγωγή ανασυνδυασμένου DNA.

Βασικές περιοχές που καλύπτονται

1. Τι είναι ένα πλασμίδιο με απλή πέψη
     – Ορισμός, Αυτοσύνδεση, Προσανατολισμός
2. Τι είναι ένα πλασμίδιο διπλής πέψης
     – Ορισμός, Διπλή πέψη, Προσανατολισμός
3. Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ ενός πλασμιδίου που έχει υποστεί πέψη και του πλασμιδίου διπλής πέψης
     – Περίληψη κοινών χαρακτηριστικών
4. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ ενός πλασμιδίου που έχει υποστεί πέψη και του πλασμιδίου διπλής πέψης
     – Σύγκριση βασικών διαφορών

Βασικοί όροι

Πλασμίδιο διπλής πέψης, διπλής πέψης, προσανατολισμός, ανασυνδυασμένο πλασμίδιο, πλασμίδιο απλής πέψης, μονής πέψης

Τι είναι το Single Digested Plasmid

Τα πλασμίδια με μία πέψη είναι ένας τύπος πλασμιδίων που χωνεύονται μόνο με ένα μόνο ένζυμο περιορισμού. Ως εκ τούτου, αυτή η διαδικασία ονομάζεται ενιαία πέψη. Γενικά, τα πλασμίδια που χρησιμοποιούνται στην τεχνολογία ανασυνδυασμένου DNA περιέχουν μόνο μία θέση περιορισμού για ένα συγκεκριμένο ένζυμο περιορισμού. Επομένως, η απλή πέψη καθιστά το κυκλικό πλασμίδιο γραμμικό, αποδίδοντας ένα μόνο θραύσμα DNA. Τα δύο άκρα αυτού του θραύσματος DNA είναι συμβατά μεταξύ τους. Επομένως, μπορούν να υποστούν αυτο-σύνδεση κατά τη διάρκεια της επακόλουθης απολίνωσης με το ένθετο.

Εικόνα 1:Μονό χωνευμένο πλασμίδιο

Εδώ, το ένθετο πρέπει επίσης να υποβληθεί σε πέψη με το ίδιο ένζυμο περιορισμού για να παραχθούν συμβατά άκρα με το πλασμίδιο. Επομένως, η απολίνωση γίνεται σε δύο πιθανούς προσανατολισμούς:στον προσανατολισμό 5' προς 3' και στον προσανατολισμό 3' προς 5'. Ωστόσο, τα ένθετα με τον ίδιο προσανατολισμό με την περιοχή προαγωγέα μπορούν να υποστούν μεταγραφή. Έτσι, αυτός ο προσανατολισμός είναι γνωστός ως σωστός προσανατολισμός. Πριν προχωρήσετε, τα ανασυνδυασμένα πλασμίδια με τον κατάλληλο προσανατολισμό πρέπει να επιλεγούν με διαλογή των μετασχηματισμένων αποικιών, είτε με PCR είτε με βιοχημικές δοκιμασίες.

Τι είναι ένα πλασμίδιο διπλής πέψης

Τα πλασμίδια διπλής πέψης είναι τα πλασμίδια που υφίστανται διπλή πέψη με δύο ένζυμα περιορισμού. Εδώ, αυτή η αντίδραση μπορεί να πραγματοποιηθεί σε ένα μόνο σωλήνα. Οι θέσεις περιορισμού και για τις δύο πέψεις εμφανίζονται εντός της θέσης περιοριστικής αναγνώρισης στο πλασμίδιο. Ως εκ τούτου, η αντίδραση διπλής πέψης οδηγεί επίσης σε ένα μόνο θραύσμα DNA. Όμως, καθένα από τα δύο άκρα παράγεται από ένα διαφορετικό ένζυμο περιορισμού. Επομένως, αυτά τα άκρα δεν είναι συμβατά μεταξύ τους και δεν υφίστανται αυτοσύνδεση.

Εικόνα 2:Διπλή πέψη πλασμίδιο

Το πιο σημαντικό, το ένθετο μπορεί να απολινωθεί με τον σωστό προσανατολισμό με πλασμίδια διπλής πέψης, χωνεύοντας τα άκρα του ενθέματος για να απολινωθεί στον σωστό προσανατολισμό. Επομένως, τα πλασμίδια με διπλή πέψη παράγουν τα ανασυνδυασμένα πλασμίδια μόνο με κατάλληλο προσανατολισμό, γεγονός που καθιστά περιττή την επακόλουθη επιλογή του προσανατολισμού. Αυτό εξοικονομεί χρόνο, καθώς μειώνει ένα πλήρες βήμα από τη διαδικασία παραγωγής ανασυνδυασμένου DNA.

Ομοιότητες μεταξύ Single Digested Plasmid and Double Digested Plasmid

• Το πλασμίδιο με μία πέψη και το πλασμίδιο διπλής πέψης είναι δύο τύποι πλασμιδίων που χρησιμοποιούνται στην τεχνολογία ανασυνδυασμένου DNA.
• Τόσο η απλή πέψη όσο και η διπλή πέψη μπορούν να γίνουν με μια αντίδραση ενός μόνο βήματος.
• Επίσης, και στα δύο, το ξένο θραύσμα DNA εισάγεται μεταξύ των δύο άκρων των χωνευμένων πλασμιδίων.
• Επιπλέον, τόσο η απλή όσο και η διπλή πέψη ενός πλασμιδίου αποδίδουν ένα μεμονωμένο θραύσμα DNA ενώ δύο θραύσματα DNA προκύπτουν όταν ένα ανασυνδυασμένο πλασμίδιο χωνεύεται.

Διαφορά μεταξύ μεμονωμένου πλασμιδίου και πλασμιδίου διπλής πέψης

Ορισμός

Το πλασμίδιο μονής πέψης αναφέρεται σε ένα πλασμίδιο που χωνεύεται από ένα μόνο ένζυμο περιορισμού, ενώ το πλασμίδιο διπλής πέψης αναφέρεται σε ένα πλασμίδιο που χωνεύεται από δύο διαφορετικά ένζυμα περιορισμού. Αυτοί οι ορισμοί εξηγούν την κύρια διαφορά μεταξύ πλασμιδίου με απλή πέψη και πλασμιδίου διπλής πέψης.

Λήγει

Στα πλασμίδια μονής πέψης, η πέψη με το ίδιο ένζυμο περιορισμού παράγει και τα δύο άκρα ενώ, σε πλασμίδια διπλής πέψης, η πέψη με διαφορετικό ένζυμο περιορισμού παράγει κάθε άκρο. Ως εκ τούτου, αυτή είναι μια σημαντική κύρια διαφορά μεταξύ πλασμιδίου μονής πέψης και πλασμιδίου διπλής πέψης.

Αυτοσύνδεση

Επιπλέον, η αυτο-σύνδεση είναι μια σημαντική κύρια διαφορά μεταξύ πλασμιδίου με απλή πέψη και πλασμιδίου διπλής πέψης. Τα άκρα των πλασμιδίων που έχουν υποστεί πέψη είναι συμβατά μεταξύ τους για αυτο-σύνδεση, ενώ τα άκρα των πλασμιδίων διπλής πέψης δεν είναι συμβατά μεταξύ τους για αυτο-σύνδεση.

Σημασία

Επιπλέον, η εισαγωγή ξένου θραύσματος DNA μπορεί να συμβεί και στους δύο προσανατολισμούς στα πλασμίδια που έχουν υποστεί πέψη, ενώ η εισαγωγή ξένου θραύσματος DNA μπορεί να γίνει με τον κατάλληλο προσανατολισμό στο διπλής πέψης πλασμίδια.

Τύποι ανασυνδυασμένων πλασμιδίων

Ένα πλασμίδιο που έχει υποστεί πέψη μπορεί να παράγει τρεις τύπους πλασμιδίων:δύο ανασυνδυασμένα πλασμίδια με αντίθετους προσανατολισμούς και ένα πλασμίδιο αυτό-συνδεμένο χωρίς ένθετο. Εν τω μεταξύ, ένα πλασμίδιο διπλής πέψης μπορεί να παράγει μόνο έναν τύπο ανασυνδυασμένου πλασμιδίου, το οποίο είναι στον σωστό προσανατολισμό. Επομένως, αυτή είναι μια άλλη βασική διαφορά μεταξύ πλασμιδίου με απλή πέψη και πλασμιδίου διπλής πέψης.

Εξοικονόμηση χρόνου

Τα ανασυνδυασμένα θραύσματα των πλασμιδίων που έχουν υποστεί πέψη πρέπει να επιλέγονται για τον σωστό προσανατολισμό τους, ενώ τα διπλής πέψης πλασμίδια διασφαλίζουν τον σωστό προσανατολισμό του ξένου θραύσματος DNA. Επομένως, τα πλασμίδια με διπλή πέψη εξοικονομούν χρόνο στις τεχνικές ανασυνδυασμένου DNA, όχι στα πλασμίδια με μία πέψη.

Συμπέρασμα

Τα πλασμίδια μονής πέψης χωνεύονται με ένα μόνο ένζυμο περιορισμού, το οποίο έχει ως αποτέλεσμα συμβατά άκρα με αυτο-σύνδεση. Επιπλέον, η απολίνωση τους με το ξένο θραύσμα DNA μπορεί να συμβεί και στους δύο προσανατολισμούς. Επομένως, πρέπει να επιλεγούν ανασυνδυασμένα πλασμίδια με κατάλληλο προσανατολισμό. Από την άλλη πλευρά, τα πλασμίδια με διπλή πέψη χωνεύονται με δύο διαφορετικά ένζυμα περιορισμού. Επομένως, τα δύο άκρα δεν είναι συμβατά για αυτο-σύνδεση. Επιπλέον, το ξένο θραύσμα DNA μπορεί να απολινωθεί στον κατάλληλο προσανατολισμό με πλασμίδια διπλής πέψης. Επομένως, η κύρια διαφορά μεταξύ πλασμιδίου με απλή πέψη και πλασμιδίου διπλής πέψης είναι ο τύπος της πέψης και ο προσανατολισμός του ενθέματος.

Αναφορά:

1. Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, et al. Εισαγωγή στη Γενετική Ανάλυση. 7η έκδοση. Νέα Υόρκη:W. H. Freeman; 2000. Κατασκευή ανασυνδυασμένου DNA. Διαθέσιμο εδώ