Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της νιτροκυτταρίνης και της μεμβράνης PVDF

Η κύρια διαφορά μεταξύ της μεμβράνης νιτροκυτταρίνης και PVDF είναι ότι η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης έχει υψηλότερη ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών ενώ η μεμβράνη PVDF έχει συγκριτικά χαμηλή ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών. Επιπλέον, τα μόρια πρωτεΐνης συνδέονται με τη μεμβράνη της νιτροκυτταρίνης μέσω υδρόφοβων αλληλεπιδράσεων ενώ τα μόρια πρωτεΐνης συνδέονται με τη μεμβράνη PVDF τόσο μέσω υδρόφοβων αλληλεπιδράσεων όσο και μέσω διπολικών αλληλεπιδράσεων. Επιπλέον, η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης έχει υψηλότερη ευαισθησία από τη μεμβράνη PVDF.

Η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης και PVDF είναι δύο τύποι μεμβρανών που χρησιμοποιούνται στο western blot για τη μεταφορά διαχωρισμένων πρωτεϊνών με ηλεκτροφόρηση γέλης. Γενικά, η κύρια λειτουργία μιας μεμβράνης στο στύπωμα είναι να χρησιμεύει ως φυσικό ικρίωμα, συγκρατώντας τα θραύσματα πρωτεΐνης.

Βασικές περιοχές που καλύπτονται

1. Τι είναι η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης
– Ορισμός, Χαρακτηριστικά, Σημασία
2. Τι είναι η μεμβράνη PVDF
– Ορισμός, Χαρακτηριστικά, Σημασία
3. Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της νιτροκυτταρίνης και της μεμβράνης PVDF
– Περίληψη κοινών χαρακτηριστικών
4. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της νιτροκυτταρίνης και της μεμβράνης PVDF
– Σύγκριση βασικών διαφορών

Βασικοί όροι

Μεμβράνη νιτροκυτταρίνης, ικανότητα δέσμευσης πρωτεΐνης, μεμβράνη PVDF, ευαισθησία, Western Blot

Τι είναι η μεμβράνη Nitrocellulose

Η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης είναι ένας από τους πρώτους τύπους μεμβρανών που χρησιμοποιήθηκαν για western blotting. Εξακολουθεί να είναι η πιο δημοφιλής επιλογή για αυτήν την τεχνική καθώς είναι στιγμιαία και σχεδόν μη αναστρέψιμη. Επίσης, η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης ενυδατώνεται εύκολα. Ωστόσο, δεν είναι κατάλληλο για απογύμνωση, επανάληψη ή σκληρές χημικές επεξεργασίες. Οι υποστηριζόμενες μεμβράνες νιτροκυτταρίνης είναι μία από τις επιλογές που έχουν καθοριστεί καθώς η αδρανής δομή στήριξης τους αυξάνει την αντοχή και την ελαστικότητα.

Εικόνα 1:Ηλεκτροφορητική μεταφορά

Επιπλέον, στο western blotting, θραύσματα πρωτεΐνης στο πήκτωμα μεταφέρονται στη μεμβράνη νιτροκυτταρίνης σε μια διαδικασία που ονομάζεται ηλεκτροφορητική μεταφορά. Η αρχή πίσω από αυτή τη διαδικασία είναι η μετανάστευση των αρνητικά φορτισμένων πρωτεϊνών προς την άνοδο.

Τι είναι η μεμβράνη PVDF

Η μεμβράνη PVDF είναι ο άλλος τύπος μεμβράνης που χρησιμοποιείται στο western blotting. Έχει υψηλότερη ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών σε σύγκριση με τη μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Έτσι, αυτό αυξάνει και την ευαισθησία της ανίχνευσης. Ωστόσο, η αυξημένη ευαισθησία οδηγεί σε υψηλότερο υπόβαθρο λόγω της ανίχνευσης πρωτεϊνών χαμηλής έκφρασης.

Εικόνα 2:Μεμβράνη νιτροκυτταρίνης

Επιπλέον, όσον αφορά τη μεμβράνη νιτροκυτταρίνης, η μεμβράνη PVDF δεν χρειάζεται να έχει προδιαβραχεί με μεθανόλη πριν από τη χρήση μαζί με το ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς. Αυτό αποτρέπει την καθίζηση πρωτεϊνών υψηλού μοριακού βάρους από διαλύματα χαμηλής SDS/υψηλής μεθανόλης. Εν τω μεταξύ, η παρουσία SDS στο ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς αυξάνει την αποτελεσματικότητα στύπωσης στις μεμβράνες PVDF.

Ομοιότητες μεταξύ Nitrocellulose και PVDF Membrane

Η νιτροκυτταρίνη και η μεμβράνη PVDF είναι δύο τύποι μεμβράνες που χρησιμοποιούνται στο western blot.
Είναι σημαντικά για τη σύνδεση των διαχωρισμένων θραύσματα πρωτεΐνης στο πήκτωμα.
Επιπλέον, η διαδικασία μετασχηματισμού λαμβάνει χώρα σε διαδικασία που ονομάζεται ηλεκτροφορητική μεταφορά.
Οι πρωτεΐνες συνδέονται με τη μεμβράνη κυρίως μέσω υδρόφοβων αλληλεπιδράσεις.
Τα τυπικά μεγέθη πόρων τους είναι 0,1, 0,2 ή 0,45 μm. Βασικά, τα μεγέθη πόρων 0,1 και 0,2 μm είναι σημαντικά για μικρά πεπτίδια και πρωτεΐνες χαμηλού μοριακού βάρους μικρότερου από 15 kDa. Η μεμβράνη 0,45 μm είναι κατάλληλη για τα περισσότερα στυπώματα πρωτεΐνης. Από την άλλη πλευρά, για τον ποσοτικό προσδιορισμό των πρωτεϊνών και όταν φορτώνονται σε χαμηλές συγκεντρώσεις, είναι καλύτερο να χρησιμοποιηθούν μικρά μεγέθη πόρων.
Επιπλέον, προ-κομμένα και προ- Οι βρεγμένες μεμβράνες σε μεθανόλη είναι ιδανικές για εφαρμογές ευκολίας, αναπαραγωγιμότητας και υψηλής απόδοσης.
Και τα δύο έχουν σημαντικά υψηλή ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών και ευαισθησία.
Μπορούν επίσης να αντιστέκονται στο φόντο και μη ειδική δέσμευση.
Επιπλέον, συγκεκριμένες πρωτεΐνες μπορούν να ανιχνευθούν με μέθοδοι χημειοφωταύγειας και φθορισμού.

Διαφορά μεταξύ νιτροκυτταρίνης και μεμβράνης PVDF

Ορισμός

Η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης αναφέρεται σε μια κολλώδη μεμβράνη που χρησιμοποιείται για την ακινητοποίηση πρωτεϊνών σε western blot. Εν τω μεταξύ, η μεμβράνη PVDF αναφέρεται στον άλλο τύπο μεμβράνης που χρησιμοποιείται στο western blot για μεταφορά πρωτεΐνης με υψηλή ικανότητα δέσμευσης.

Φυσικά χαρακτηριστικά

Η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης είναι εύθραυστη και εύθραυστη, ενώ η μεμβράνη PVDF είναι φυσικά ανθεκτική.

Ανθεκτικό σε χημικές ουσίες

Ενώ η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης δεν είναι χημικά ανθεκτική, η μεμβράνη PVDF είναι χημικά ανθεκτική.

Προ-βρέξιμο

Η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης πρέπει να προδιαβραχεί με μεθανόλη, ενώ η μεμβράνη PVDF δεν χρειάζεται να προδιαβρέξει.

Ικανότητα δέσμευσης πρωτεΐνης

Επιπλέον, η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης έχει σχετικά χαμηλή ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών (80-100 μg/cm2) ενώ η μεμβράνη PVDF έχει υψηλή ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών (170-200 μg/cm2 ).

Αλληλεπιδράσεις πρωτεϊνών

Οι πρωτεΐνες συνδέονται με τη μεμβράνη νιτροκυτταρίνης μέσω υδρόφοβων αλληλεπιδράσεων ενώ συνδέονται με τη μεμβράνη PVDF μέσω υδρόφοβων και διπολικών αλληλεπιδράσεων.

SDS

Η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης δεν απαιτεί SDS στο ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς, το οποίο ενισχύει τη σύνδεση πρωτεϊνών χαμηλού μοριακού βάρους και βοηθά στην πρόληψη της υπερβολικής μεταφοράς πρωτεϊνών μέσω της μεμβράνης, ενώ το SDS ενισχύει την αποτελεσματικότητα στύπωσης πρωτεϊνών στη μεμβράνη PVDF.

Χρήση στο Western Blotting

Ενώ η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης χρησιμοποιείται για τις πρωτεΐνες χαμηλού μοριακού βάρους, η μεμβράνη PVDF χρησιμοποιείται για τις πρωτεΐνες υψηλού μοριακού βάρους.

Ευαισθησία

Επιπλέον, η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης έχει σχετικά χαμηλή ευαισθησία ενώ η μεμβράνη PVDF έχει υψηλή ευαισθησία λόγω της υψηλότερης ικανότητας δέσμευσης.

Φόντο

Η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης παράγει χαμηλότερο υπόβαθρο λόγω της μικρότερης ευαισθησίας της, ενώ η μεμβράνη PVDF έχει υψηλότερο υπόβαθρο λόγω της μεγαλύτερης ευαισθησίας της στην ανίχνευση πρωτεϊνών με χαμηλότερη έκφραση.

Απογύμνωση και επανεξέταση

Επιπλέον, η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης είναι δύσκολο να απογυμνωθεί και να ανιχνευτεί ξανά, ενώ η μεμβράνη PVDF είναι εύκολο να απογυμνωθεί και να ανιχνευτεί ξανά λόγω της υψηλότερης υδροφοβικότητάς της.

Άλλες χρήσεις

Η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης χρησιμοποιείται για την ανάλυση νουκλεϊκών οξέων (<300 bp), ανάλυση αμινοξέων και στύπωμα κουκκίδας/σχισμής, ενώ η μεμβράνη PVDF χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό αλληλουχίας πρωτεϊνών, αμινοξέων ανάλυση και συστήματα προσδιορισμού στερεάς φάσης.

Συμπέρασμα

Η μεμβράνη νιτροκυτταρίνης είναι ο τύπος μεμβράνης που είναι σημαντικός στο western blot. Ωστόσο, έχει συγκριτικά χαμηλή ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών και ευαισθησία. Παράγει επίσης χαμηλότερο φόντο. Επιπλέον, χρησιμοποιείται κυρίως στον διαχωρισμό πρωτεϊνών υψηλού μοριακού βάρους. Η μεμβράνη PVDF είναι ο άλλος τύπος μεμβράνης που χρησιμοποιείται στο western blot για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών υψηλού μοριακού βάρους. Επιπλέον, αυτή η μεμβράνη έχει συγκριτικά υψηλότερη ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών και ευαισθησία. Ωστόσο, παράγει ένα υψηλότερο υπόβαθρο. Επομένως, η κύρια διαφορά μεταξύ της μεμβράνης νιτροκυτταρίνης και PVDF είναι η ικανότητα και η ευαισθησία τους στη δέσμευση πρωτεϊνών.