Γιατί πρέπει να κόψετε το πλασμίδιο και το κυτταρικό DNA με το ίδιο ένζυμο περιορισμού;

Πρέπει να κόψετε το πλασμίδιο και το κυτταρικό DNA με το ίδιο ένζυμο περιορισμού για έναν κρίσιμο λόγο στη γενετική μηχανική: για να δημιουργήσετε συμβατά άκρα που μπορούν να συνδεθούν μαζί.

Εδώ είναι γιατί:

1. Ένζυμα περιορισμού είναι σαν μοριακά ψαλίδια που αναγνωρίζουν συγκεκριμένες αλληλουχίες DNA (θέσεις περιορισμού) και κόβουν το DNA σε αυτές τις θέσεις.

2. Κάθε ένζυμο περιορισμού κόβει το DNA με συγκεκριμένο τρόπο , αφήνοντας πίσω είτε "κολλώδη άκρα" (σύντομες μονοτέρχες προεξοχές) είτε "αμβλύ άκρα" (χωρίς προεξοχές).

3. Ο στόχος της γενετικής μηχανικής είναι να εισαγάγετε ένα γονίδιο ενδιαφέροντος (από το κυτταρικό DNA) σε ένα πλασμίδιο (ένα μικρό κυκλικό κομμάτι DNA) .

4. για να συμμετάσχετε σε αυτά τα δύο κομμάτια DNA , τα άκρα τους πρέπει να είναι συμβατά. Αυτό σημαίνει ότι πρέπει να έχουν και τα δύο κολλώδη άκρα με συμπληρωματικές ακολουθίες ή και οι δύο έχουν αμβλύ άκρα.

5. Η κοπή τόσο του πλασμιδίου όσο και του κυττάρου με το ίδιο ένζυμο περιορισμού εξασφαλίζει ότι τα θραύσματα που προκύπτουν θα έχουν συμβατά άκρα. Αυτό επιτρέπει την εισαγωγή του γονιδίου ενδιαφέροντος στο πλασμίδιο, δημιουργώντας ένα ανασυνδυασμένο πλασμίδιο που στη συνέχεια μπορεί να εισαχθεί σε ένα κύτταρο ξενιστή.

Συνοπτικά: Η κοπή τόσο του πλασμιδίου όσο και του κυττάρου με το ίδιο ένζυμο περιορισμού δημιουργεί συμπληρωματικά άκρα που μπορούν να συνδεθούν μεταξύ τους, επιτρέποντας την εισαγωγή του γονιδίου ενδιαφέροντος στο πλασμίδιο. Αυτό είναι ένα θεμελιώδες βήμα σε πολλές τεχνικές γενετικής μηχανικής.