Γιατί το 75 % αιθανόλη χρησιμοποιείται στην εκχύλιση RNA;
Εδώ είναι γιατί:
* βροχόπτωση RNA: Η αιθανόλη βοηθά στην καθίζηση του RNA από το διάλυμα. Το RNA είναι πολύ διαλυτό στο νερό, αλλά όταν προστίθεται αιθανόλη, μειώνει τη διαλυτότητα του RNA, προκαλώντας την εξαίρεση από το διάλυμα ως στερεό ίζημα.
* Πλινούν τις ακαθαρσίες: Κατά τη διάρκεια του βήματος πλύσης, η αιθανόλη βοηθά στην απομάκρυνση μολυσματικών ουσιών όπως τα άλατα, οι πρωτεΐνες και άλλα κυτταρικά συντρίμμια που μπορεί να υπάρχουν στο δείγμα RNA.
Πώς λειτουργεί:
1. Η αιθανόλη είναι ένας παράγοντας αφυδάτωσης, που σημαίνει ότι αφαιρεί νερό από το διάλυμα. Αυτή η μείωση της περιεκτικότητας σε νερό μειώνει τη διαλυτότητα του RNA, οδηγώντας σε βροχόπτωση.
2. αποτέλεσμα άλατος: Στα περισσότερα πρωτόκολλα εκχύλισης RNA, ένα διάλυμα άλατος όπως το οξικό νάτριο προστίθεται πριν από την αιθανόλη. Αυτό το άλας βοηθά στην εξουδετέρωση του αρνητικού φορτίου του μορίου RNA, καθιστώντας το λιγότερο διαλυτό στο νερό και πιο πιθανό να καταβυθιστεί.
3. Επιλεκτικότητα: Ενώ η αιθανόλη κατακρημνίζει RNA, δεν καθορίζει το DNA ως αποτελεσματικά. Αυτό βοηθά να διασφαλιστεί ότι το τελικό δείγμα RNA είναι σχετικά απαλλαγμένο από μόλυνση DNA.
Σημαντικές εκτιμήσεις:
* Συγκέντρωση αιθανόλης: Η συγκέντρωση της αιθανόλης που χρησιμοποιείται στην εκχύλιση RNA είναι κρίσιμη. Η πολύ χαμηλή συγκέντρωση μπορεί να μην είναι αποτελεσματική στο κατακρημνισμό του RNA, ενώ πολύ υψηλή συγκέντρωση μπορεί να οδηγήσει στην καθίζηση άλλων ανεπιθύμητων συστατικών. Η αιθανόλη 75% χρησιμοποιείται συνήθως επειδή παρέχει μια βέλτιστη ισορροπία για βροχοπτώσεις και πλύση.
* Θερμοκρασία: Η κατακρήμνιση με αιθανόλη συνήθως εκτελείται σε χαμηλές θερμοκρασίες, συχνά σε πάγο ή στους 4 ° C, για να ελαχιστοποιηθεί η αποικοδόμηση του RNA.
Συνολικά, η αιθανόλη 75% παίζει κρίσιμο ρόλο στην εκχύλιση RNA με κατακρημνίζοντας το RNA από διάλυμα και πλύση μολυσματικών ουσιών, εξασφαλίζοντας την απομόνωση καθαρού και άθικτου RNA
