Προκειμένου ένα βακτήριο να παράγει ευκαρυωτική πρωτεΐνη τι πρέπει πρώτα να απομονωθεί από την προηγούμενη κλωνοποίηση των κυττάρων;
Εδώ είναι γιατί:
* Τα γονίδια είναι τα σχέδια: Τα γονίδια περιέχουν τις οδηγίες για την κατασκευή πρωτεϊνών.
* Τα βακτήρια δεν μπορούν να διαβάσουν τα ευκαρυωτικά γονίδια απευθείας: Τα βακτηριακά κύτταρα χρησιμοποιούν διαφορετικό γενετικό κώδικα από τα ευκαρυωτικά κύτταρα. Δεν μπορούν να μεταφράσουν το ευκαρυωτικό γονίδιο απευθείας σε πρωτεΐνη.
* Η κλωνοποίηση είναι η λύση: Με την απομόνωση του ευκαρυωτικού γονιδίου και την τοποθέτησή του σε ένα βακτηριακό φορέα έκφρασης, μπορείτε να εξαπατήσετε τα βακτήρια στην ανάγνωση και τη μετάφραση του γονιδίου, παράγοντας την επιθυμητή ευκαρυωτική πρωτεΐνη.
Βήματα που εμπλέκονται στην απομόνωση ενός ευκαρυωτικού γονιδίου για την κλωνοποίηση:
1. Απομόνωση mRNA: Εξαγόμενο RNA Messenger (mRNA) από το ευκαρυωτικό κύτταρο. Αυτό το mRNA μεταφέρει τον γενετικό κώδικα για την επιθυμητή πρωτεΐνη.
2. Αντίστροφη μεταγραφή: Μετατρέψτε το mRNA σε συμπληρωματικό DNA (cDNA) χρησιμοποιώντας αντίστροφη μεταγραφάση. Το cDNA είναι ένα αντίγραφο DNA του mRNA και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για κλωνοποίηση.
3. κλωνοποίηση: Τοποθετήστε το cDNA σε ένα διάνυσμα βακτηριακής έκφρασης. Αυτός ο φορέας είναι ένα κομμάτι DNA που μπορεί να αναπαραχθεί σε βακτήρια και περιέχει όλα τα απαραίτητα στοιχεία για την γονιδιακή έκφραση.
Μόλις τα βακτηριακά κύτταρα αναλάβουν τον φορέα, θα αρχίσουν να παράγουν την ευκαρυωτική πρωτεΐνη.
